生长素 GHRELIN 放免检测服务
生长素 GHRELIN 放免试剂盒操作说明书
GHRELIN 是一种含 28 个氨基酸残基的脑肠肽,主要由胃黏膜的内分泌细胞分泌,是生长激素
促分泌素受体(GHS-R)的一种内源性配体,1999 年由日本国立循环器病中心 Kojima 等[1]人从小鼠和
人的胃组织中成功分离并鉴定.Ghrelin 系由 28 个氨基酸构成的多肽,能够和 GHS-R 结合而刺激生长
激素 GH 的分泌.就目前的研究报道来看,Ghrelin 除调节生长激素分泌外,还在能量平衡、胃功能、心
血管系统以及肿瘤生长等诸多方面表现出重要的生物学效应.
标本采集:采血前试管内加放抑肽酶 30ul/5ml(含 150 IU 以上)和 10%EDTA.Na2 30uL,采血后
立即置冰中,30 分钟内 4℃下 2000 转/分,离心 15 分钟取血浆置-20℃待测,可保存 3-6 个月。
组成:
1、GHRELIN 抗体一瓶。
2、125 I-GHRELIN 标记一瓶。
3、缓冲液一瓶。
4、分离剂(第二抗体)一瓶。
5、GHRELIN 标准品 1 瓶,倍比稀释浓度为:10、 20、40、80、 160、320、640、1280ng/ml
结果计算:
以 N/T、B/T 计算 NSB、S0结合百分率,以 B/B0 计算标准及待测物结合百分率,
在半对数座标纸上绘制标准曲线,并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果.
附:血浆标本过柱步骤:
1、取 0.5ml 血浆和 0.5ml 含 1%的 TFA(缓冲液 A ),在 4℃下 3500 转/分 离心 20 分钟,取上清。
2、在含 60%乙晴溶液中加 1%TFA,即为缓冲液 B,将缓冲液 B 3ml 对 Sep-Pak C18 柱进行平衡,
接着用缓冲液 A 3ml 冲洗。
3、将 1 处理的上清血浆缓慢注入 Sep-Pak C18柱中。
4、用缓冲液 A 5ml 以 1ml/2 分钟速度淋洗 Sep-Pak C18 柱。
5、再用缓冲液 B 3ml 淋洗 Sep-Pak C18,速度为 1ml/3 分钟,并收集上述淋洗液。
6、将上述淋洗液全部分别装入 10ml 西林瓶中,-42℃ 冷冻干燥 ,备用。7、取干燥后的西林瓶用 500 ul 0.05M PH 7.4 PB 进行溶解,并在振荡器上振荡 3 分钟。实验时取 200ul 进行加样。操作步骤见说明书。 Sep-Pak C-18: Waters.inc. Massachusetts.USA TFA:SIGMA .CO .USA 盒不提供上述二种 试剂(或材料)。
正常参考值:55.25-95.140ng/ml 78.25±11.29ng/ml