大鼠胰岛素原(PI)ELISA试剂盒

标本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
样品收集、处理及保存方法：
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
实验原理：
大鼠胰岛素原(PI)ELISA试剂盒本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中待测物质水平。用纯化的待测物质抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入待测物质，再与HRP标记 的待测物质抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终 的黄色。颜色的深浅和样品中的待测物质呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中待测物质浓度。

产品名称	英文名称	规格
大鼠胰岛素原(PI)ELISA试剂盒	Rat Proinsulin,PI ELISA Kit	48T/96T

操作步骤：
1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.
10.终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品 OD 值< 临界值（CUT OFF）者为金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)阴性 阳性判定：样品 OD 值≥ 临界值（CUT OFF）者为金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)阳性。
公司正在出售的产品：

人胚肾细胞;293 [HEK-293]	CL-0110HL-60(人早幼粒急性白血病细胞)5×106cells/瓶×2
粒体/氢交换蛋白质2抗体	人脐动脉内皮细胞裂解物HUAECL
自身抗原EDC4抗体	大鼠视网膜muller细胞 100mL
神经细胞特异性钙结合蛋白抗体	PC-12(高分化)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化) PC-12 (high differeiation) rat pheochromocytoma cells (high differeiation) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
3号染色体开放阅读框23抗体	MLTC-1(小鼠间质细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 FGFR2 / CD332 人细胞裂解液 (阳性对照)
淋巴细胞抗原76抗体	TFRC Others Cynomolgus 食蟹猴 ansferrin Receptor / TFRC / CD71 人细胞裂解液 (阳性对照)
6号染色体开放阅读框151抗体	5637(HTB-9)细胞，人膀胱癌细胞 大鼠肝癌细胞(癌细胞接种到肝脏成瘤),Walker-256细胞 MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞
G蛋白α抑制剂抗体	LCN2 Others Mouse 小鼠 LCN2 / NGAL 人细胞裂解液 (阳性对照)
酰基辅酶A合成酶家族4抗体	人肾系膜细胞 (HRMC)(1×106 ) 细胞名称 种属
酸化原活化蛋白激酶MKK3/6抗体	SERPINA3 Others Human 人 SerpinA3 / AACT 人细胞裂解液 (阳性对照)
补体C3b抗体	B2M Others Rat 大鼠 B2M / Beta-2-microglobulin 人细胞裂解液 (阳性对照)
生长调节致癌基因-1抗体GROa	大鼠胰岛素原(PI)ELISA试剂盒3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞
巴尔得-别德尔综合征相关蛋白8抗体	TFPI2 Others Mouse 小鼠 TFPI2 / PP5 人细胞裂解液 (阳性对照)
白介素20受体β链抗体	大鼠肺细胞;WL1
胶原蛋白和钙结合表皮生长因子结构域1抗体	LSAMP Others Human 人 LSAMP 人细胞裂解液 (阳性对照)

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