- ￥680 - 1280
- KEMOBio
- 进口/国产
- KM101985
- 2025年07月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃
- 保质期：
90天
- 英文名：
pSE100
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
- 规格：
0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pSE100
货号：KM101985
图谱：微客服
宿主：分枝杆菌
用途：
片段类型：
片段物种：
原核抗性：Hyg
真核抗性：
荧光标记：
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文献和实验【鸡毛蒜皮】之3重组质粒是“筛”出来的吗？ 重组质粒的筛选是质粒构建的重要步骤，重组子是筛出来的，这个命题没有问题。问题是最关键步骤不在筛选。影响重组质粒构建效率的最关键步骤在于酶切，不管是否是定向克隆还是非定向克隆。酶切的关键在于切干净，彻底的酶切反应是成功的一半，尤其是载体的酶切。 1） 酶切反应的前提是对质粒载体的大致定量，一般大小的质粒（3－5kb）一次连接的用量在100ng左右，一般挖胶回收的损失在50%左右，为保证一次酶切反应可以进行至少三次连接，质粒载体的量在1微克左右
1 、将转染后的细胞按照一定的比例接种到 6 孔板中（一般选用 1 ： 10 和 1 ： 100 两个梯度），分别采用 1200 m g/ml ， 1000 m g/ml 和 800 m g/ml 的 G418 进行筛选； 以转染携带 EGFP 质粒载体的细胞作为阳性对照，以未转染质粒载体的细胞作为阴性对照； 2 、每 3 ～ 4 天换液一次； 3 、筛选 20 ～ 30 天，即可得到稳定表达细胞株； 4 、传代后，以一定的 G418 浓度
非病毒载体介导的基因治疗有许多优点，但就目前大多数表达体系而言普遍存在外源基因表达水平低而短暂等问题为了使外源基因稳定持续表达，必须对质粒DNA 进行改造。附着体质粒载体(episomal vector)可以使外源基因以附着体形式复制，分离到子代细胞，从而使基因高效持续表达，是种新型的非病毒表达载体 。 我们构建了以EB病毒(Epstein Barr virus，EBV)复制子(EBV replicon，EBVR)为基础的附着体质粒载体，并将报告基因增强型绿色
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