- ￥11500
- 爱必信(absin)
- 上海
- abs60552
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
试剂盒应在-20℃条件下保存，有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在规定储存条件下保存。
- 保质期：
试剂盒应在-20℃条件下保存，有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在规定储存条件下保存。
- 英文名：
-
- 库存：
现货
- 供应商：
爱必信(上海)生物科技有限公司
- CAS号：
-
- 规格：
100T
| 概述 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 描述 | 以质粒/Minicircle DNA为代表的DNA产品可以作为DNA疫苗产品的主要成分之一，也可作为病毒载体或DNA载体基因疗法的重要原料，病毒载体或非病毒载体细胞免疫疗法的重要原料。这些DNA产品的RNA残留可能影响其生物学活性（如干扰质粒的转染、表达效率）或造成风险（如外源RNA可激活细胞干扰素通路引发免疫反应），因此需建立DNA产品的RNA残留定量检测方法。 本试剂盒配套有E.coli RNA定量参考品可快速准确定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中E.coli（DH5α、BL21等）宿主细胞RNA残留量。 建议所有使用该试剂盒的实验室按需可做以下验证：标准品线性、 样本线性、 准确度（加标回收率）、定量限、精密度(重复性)、 分析特异性以及阴性参考品符合率。 样本线性：依据 YY/T 1182-2020 的相关要求，在线性范围内，取接近线性范围上限的高值样本按一定比例（如 5 倍或 10 倍）稀释为至少 5 种浓度，其中低值浓度样本须接近线性范围的下限，将每一浓度样本检测 1 次或多次，计算每一浓度的对数均值和稀释比例(或理论浓度)的对数值，以浓度的对数均值为 Y，稀释比例(或理论浓度)的对数值为 X 进行线性拟合，计算其线性相关系数 r。 分析特异性验证：验证需避免工艺杂质对检测结果的干扰，必要时可对样本进行核酸提取纯化。为避免基质干扰和保证检测有效性建议使用纯度较高的 DNA 进行相应稀释后来做验证。 精密度/定量限：验证时，如需同时配制标曲，需控制 CV，避免重复操作过多，CV 偏大影响标曲建立和精密度/定量限验证。 数据分析：由于仪器不同，数据阈值线会存在区别，故在数据分析时需依据实际情况统一阈值线再进行数据分析比较。 样本核酸提取纯化：可与“宿主细胞残留 DNA（磁珠法）样本前处理试剂盒”配合使用。该试剂盒主要用于生物制品样本中微量核酸的提取，可精准抽提各种生物制品中宿主细胞残留 DNA，适 用于多种基质缓冲溶液，可有效提取纯化微量的 DNA。 产品特点： 本试剂盒利用荧光探针原理，可定量检测样品中E.coli 残留RNA。检测快速，专一性强，性能可靠，试剂盒线性范围为：200 pg/μL~0.002 pg/μL，最低检测限为2 fg/μL。 产品性能指标： 线性范围：200 pg/µL-0.002 pg/µL。 标准品线性：R2≥0.980，扩增效率 90%≤Eff（%）≤110%，各浓度检测值 CV<15%。 样本线性：依据 YY/T 1182-2020 的相关要求，在线性范围内，取接近线性范围上限的高值样本按一定比例（如 5 倍或 10 倍）稀释为至少 5 种浓度，其中低值浓度样本须接近线性范围的下限，将每一浓度样本检测 1 次或多次，计算每一浓度的对数均值和稀释比例(或理论浓度)的对数值，以浓度的对数均值为 Y，稀释比例(或理论浓度)的对数值为 X 进行线性拟合，计算其线性相关系数 r。 准确度（加标回收率）：70%-130%。 定量限：0.002 pg/µL，CV≤20%，测量偏差不大于|±20%|。 精密度（重复性）：高、低两个浓度参考品各 10 次，变异系数 CV<15%。 阴性参考品符合率：比标准曲线中最低点高 2~3 个 Ct 值左右。 适用机型（包括但不限于）：ABI QuantStudio 3 Real-Time PCR System；ABI 7500 Real-Time PCR System；Bio-Rad CFX Opus 96 Real-Time PCR System。 冻融稳定性：5 次以上。 |
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| 产品组成 |
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| 用途说明 | 本试剂盒配套有 E.coli RNA 定量参考品可快速准确定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中 E.coli（DH5α、BL21 等）宿主细胞 RNA 残留量。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 使用方法 | 一、准备工作： 1、试剂盒准备： 将试剂盒各组分置于冰上或 4℃，确保充分溶解后开始操作。 2、需自备的试剂： DNase Ⅰ（RNase-free） 3、需自备的耗材及设备： （1）荧光定量 PCR 仪、涡旋仪、离心机 （2）高精度移液器及一次性无菌无酶低吸附带滤芯吸头（0.5-10µL、10-100µL、20-200µL、100-1000µL） （3）1.5mL 无菌无酶低吸附离心管 （4）无菌无酶八联管或 96 孔 qPCR 板 二、操作流程 ： 1、操作详细步骤 （1）待测样品的前处理： 样品中残留 RNA 的提取纯化可采用宿主细胞残留 DNA （磁珠法）样品预处理试剂盒（abs60544）。待测样品在检测前需要进行 DNase 处理以消除 gDNA 对检测的影响。DNase 用量和消化条件需按 DNase 的使用说明以及实际样品进行优化。 建议设置加标样品，与待测样品进行同步处理，作为回收率考察。 （2）qRT-PCR 反应液的制备： ①根据所需检测的参考品和待测样品数量（一般做 3 组复孔），分别计算各片段反应所需孔数： 反应孔数=（参考品 ST1-6 +1 个无模板对照 NTC+待测样品）×3 ②根据反应孔数计算本次所需的 E.coli RNA qRT-PCR MIX 总量： E.coli RNA qRT-PCR MIX =（反应孔数+2 或 3）×4 μL（One Step qRT-PCR Reaction MIX）+（反应孔数+2 或 3）×1 μL（One Step Enzyme MIX）+（反应孔数+2 或 3）×10 μL（E.coli RNA Primer&Probe MIX）（2 或 3 为操作损失量） ③将所用试剂置于冰上完全溶解，轻微振荡混匀，瞬时离心，按表 2 所示配制 E.coli RNA qRT-PCR MIX。 表 2 qPCR MIX 配制表
④将配制的 qRT-PCR MIX，轻微振荡混匀，瞬时离心，按 15μL/孔分装至八联管或者 96 孔板中。 ⑤将RNA稀释液按5μL/孔加到分装了 qRT-PCR MIX 八联管或者 96 孔板中，具体加样见表 4。 （3）定量参考品的稀释： （注：根据试剂盒提供的标准品按照需求配制） 用试剂盒提供的 RNA 稀释液将 RNA 定量参考品（20ng/μL）系列倍比（稀释倍数：10 倍）稀释，稀释浓度依次为 2000 pg/μL，200 pg/μL，20 pg/μL，2 pg/μL，0.2 pg/μL，0.02 pg/μL，0.002 pg/μL。 具体步骤如下： ①将试剂盒中的 RNA 定量参考品和 RNA 稀释液置于冰上或 2-8℃条件下融化。待完全溶解后，轻微振荡混匀，离心 3~5 s。 ②取干净的 1.5 mL 离心管，分别标记为 ST0，ST1，ST2，ST3，ST4，ST5，ST6。 ③在 ST0 管中用 RNA 稀释液将 RNA 定量参考品（20ng/μL）稀释至 2000 pg/μL，轻微振荡混匀，离心 3~5 s。确保 RNA 定量参考品与RNA 稀释液充分混匀，使用时避免反复冻融。 ④在 ST1，ST2，ST3，ST4，ST5，ST6 管中分别加入 90μL RNA 稀释液，再进行梯度稀释，稀释方法如下所示： 表 3 DNA 定量参考品的稀释
 【注】：标准曲线浓度点可根据实际验证结果进行选择，应至少包含 5 个浓度点。
【注】：无模板对照 NTC 为防污染，在反应液配制时已经加样完成。 ①Experiment name：修改实验名称。 3) 在 Plate Setup 4) 设 置 反 应 程 序 ：
 5) 点 击 Run 界 面 的 “Start Run”按 钮 进 行 PCR 测 定 。 三、结果分析： 2、结果分析的参数设置需依据具体的机型及使用的软件版本，一般也可由仪器自动判读。 |
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| 性能 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 储存/保存方法 | 试剂盒应在-20℃条件下保存，有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在规定储存条件下保存。 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 注意事项 | 1、本试剂盒已通过稳定性（冻融等因素）的验证，无需分装。 2、对样本前处理后，需要进行 DNase 处理以消除 gDNA 对检测的影响 3、阴性样品（E.coli RNA Primer&Probe MIX、One Step qRT-PCR Reaction MIX、One Step Enzyme MIX、RNA 稀释液）和阳性样品（参考品和待测样品等）的配制环境需区分区域，不可在一个区域内操作，配制人员需穿戴整齐，戴好口罩、手套和穿好洁净服。 4、因为 RNA 容易被 RNA 酶降解，在涉及 RNA 的相关操作实验以及操作环境中需避免 RNA 酶的使用。如质粒提取过程中会涉及 RNA 酶的使用，则 RNA 检测时需避开其相关操作环境。 5、注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染，避免长时开盖，使用移液器移液时，需避免液体挂壁。 6、试剂盒必须在有效期内使用，每次实验均需重新制备相应的标准曲线，不建议不同标准曲线之间混用，不建议不同批次的相关试剂混用。 7、试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用，且需确保其充分溶解，各组分使用前需充分混匀，以保证试剂的均一性，经混匀的试剂需经短暂离心，以使管壁及盖子上的液体全部集中于管底。 8、操作过程建议在冰上进行。 9、只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。 10、最终的实验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及实验环境密切相关。 11、公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。 |
①界面，点击
②创建探针，在TargetName中编辑探针名称分别命名为 E.coli-RNA，在Reporter③和Quencher④中选择所需的荧光基团和淬灭基团。本产品荧光基团选择FAM，淬灭基团为None（参比荧光为ROX）。点击
⑤创建样品，在相应的Samplename⑥一栏中命名样品的名称。
①界面，将标准曲线孔在 Task② 一栏设置为“S”③，并且在 Quantity④一栏分别赋值设为 200，20，2，0.2，0.02，0.002（单位为 pg/μL），并且在相应的 Sample name 一栏中命名为ST1，ST2，ST3，ST4，ST5，ST6。在 Plate Setup
①界面中，将无模板对照 NTC 孔在 Task②一栏设置为“N”⑤，将待测样本孔在Task②一栏设置为“U”⑥，并且在相应的 Sample name 一栏中命名样品的名称。（图例仅供参考）
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