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- Fermentas
- SM0192
- 2025年08月03日
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25x50 µg
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文献和实验Recombineering/Lambda red-mediated gene replacement
Electroprate linear DNA into electrocompetent cells Grow at 37°C on chloramphenicol plates PCR verify the deletion with oligos C and D (see below for design) Detailed procedure Day 0: Start overnight culture
糖凝胶分离的范围 试剂： (1)1 X TAE电泳缓冲液：45mmol/Ltris-硼酸，1mmol/LEDTA，pH8.0 (2)凝胶加样缓冲液：0.25%溴酚蓝，40%蔗糖水溶液。 (3)λ-DNA和提取的DNA λ-DNA是λ噬菌体的基因组DNA，全长50kb。用HindIII或(和)BamHI酶切得到的片段被广泛用于DNA电泳的分子量标准。 (4)分子量标准(&lambda
+HindIII对质粒DNA进行双酶切，以便进行某基因的克隆。 那么，我们建议，同时设计并进行三种酶切反应： A: EcoRI+HindIII 双酶切 B: EcoRI单酶切 C: HindIII单酶切 在酶切时，ABC三种酶切反应都用相同的buffer系统，相同的DNA量（建议至少0.5ug）， 所需的酶量用DDDesigner进行计算。在合适的温度（37度）酶切1-2个小时， 然后进行电泳分析。电泳分析时，添加两种对照：D:未酶切的质粒DNA和分子量标准
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