D-Hanks（无钙镁，无酚红），无菌

动物细胞培养中Hanks液、D-Hanks液和消化液的配制方法

则是无钙镁离子的Hanks液。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在BSS中可生存几个小时。 胰蛋白酶(胰酸)溶液是一种常用的细胞消化液，原代培养 时用于处理组织块，使细胞分离下来。传代时用胰蛋白酶使培养细胞离开所贴附的培养瓶表面，并分散成单个细胞。胰蛋白酶主要采自牛或猪的胰脏，呈白色粉末状，易潮解，应在低温干燥处保存。胰酶的活力常用一份胰酶解离酪蛋白的份数表示，常用胰酶活力为1：125或1：250。本实验

胶原酶

。你做的血管细胞是什么血管，我们实验室有人做人脐静脉内皮细胞的，都不用2型胶原酶的，用胰酶就可以。丁香园网友hdemonm的观点为：配制胶原酶Ⅱ型应该用无钙镁离子的D-Hank's或是PBS都行。丁香园网友nfm2005的观点为：胶原酶应该用d-hanks液配。完全培养基中含血清，血清对细胞有保护作用，不利于细胞分散，不要用完全培养基配酶。酶液的用量原则上为，组织量：酶液=1：3~4

细胞分离技术

1. 从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。 从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。 （1）胰蛋白酶 (Trypsin) ●在去除不需要的组织后，使用无菌的解剖刀和剪子把剩余的组织切成3~4 mm小片，通过悬浮在无钙镁的平衡盐溶液中清洗组织碎片。让组织碎片沉淀，去除上清