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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
RT/2-8℃/-20℃
- 保质期:
3年
- 英文名:
1,1-Dioctadecyl-3,3,3,3- tetram.ethylindocarbocyanine iodide
- 库存:
999
- 供应商:
北京康瑞纳生物科技有限公司
- CAS号:
41085-99-8
- 规格:
10mg
DiI 细胞膜橙色荧光探针 41085-99-8 DiI 细胞膜橙色荧光探针 41085-99-8
产品名称:DiI 细胞膜橙色荧光探针 41085-99-8
产品编号:A1793
中文别称 DiI荧光染料
英文别称 1,1-Dioctadecyl-3,3,3,3- tetram.ethylindocarbocyanine iodide
分子式 C59H97ClN2O4
分子量 933.88
储存条件 -20℃干燥避光保存, 有效期 1年
溶解性 DMSO或EtOH
包装 瓶
规格 10mg
DiI即DiIC18(3),全称为1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramet.hylindocarbocyanine perchlorate,是最常用的细胞膜荧光探针之一,呈现橙红色荧光。DiI是一种亲脂性膜染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。
DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI被激发后可以发出橙红色的荧光,DiI和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱。其中,最大激发波长为549nm,最大发射波长为565nm。
DiI可以溶解于无水乙醇、DMSO和DMF,溶解度约为1-2.5mg/ml。发现较难溶解时可以适当加热,并用超声处理以促进溶解。
DiI被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-termtracer)。DiI通常不会影响细胞的生存力(viability)。被DiI标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达4周,在体内可以长达一年。DiI在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2-0.6mm/day,在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为6mm/day。
DiI除了最简单的细胞膜荧光标记外,还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
用于细胞膜荧光标记时,DiI的常用浓度为1-25μM,最常用的浓度为5-10μM。DiI可以直接染色活的细胞或组织,染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织,通常宜使用配制在PBS中的4%多聚.甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
1. DiD,DiO,DiI,DiR 和 DiS 细胞膜染色液制备
(1) 配置 DMSO 或 EtOH 储存液:储存液用 DMSO 或 EtOH 配置浓度 1~5 mM。
(2) 注意:未使用的储存液保存在-20℃,避免反复冻融。 (3) 工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS 或 PBS)稀释储存液,配制浓度为 1~5µM 的工 作液。 注意:工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。
2. 悬浮细胞染色
(1) 悬浮细胞密度为 1 × 106/mL 加入到工作液中。
(2) 在 37 ℃培养细胞 2~20 分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。
(3) 染色细胞试管在 1000~1500 转离心 5 分钟。
(4) 倾倒上清液,再次缓慢加入预温 37℃的培养液。
(5) 重复(3),(4)步骤两次以上。
3. 粘壁细胞的染色
(1) 使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
(2) 从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3) 在盖玻片的一角加入 100µL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 在 37 ℃培养细胞 2~20 分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。
(5) 吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片 2~3 次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,培养 5~10 分钟,然 后吸干培养基。
实验参考图


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