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文献和实验FITC标记的B抗体染色,根据两种抗体的动物种属不同,可用直接法也可用间接法,结果A抗原呈现橘红色荧光,而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中,常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如,在实验设计时,选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗,相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时,由于两种一抗种属来源不同,可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗,滴加二抗时,先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育,洗涤后,滴加SABC-Cy
方式小鼠的细胞正选是采用间接标记的方式。先将小鼠的细胞与PE标记的抗靶细胞的特异性抗体结合,再采用StemCell公司的专利TAC技术将PE标记的细胞与EasySep®免疫磁珠相连。在EasySep®专用磁极提供的磁场中,即可使靶细胞与非靶细胞分离。您可以使用我们提供的完整的试剂盒分选小鼠的细胞,也可以选择EasySep® PE、FITC或生物素分选系统与自己的PE、FITC或生物素—偶联的单抗相结合,来富集任何所需的细胞。用于负选小鼠的细胞标记方式EasySep®小鼠的细胞负选也是采用间接标记
流式抗体的选择和配色原则由于在流式细胞实验过程中,荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此,需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素,例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。本文介绍如何选择合适的流式抗体: 1、需要满足抗体选择的最基本条件:目标蛋白特异性,反应种属以及应用实验等。 靶标特异性:确定标记物名称,确定是细胞表面表达,还是细胞内表达。细胞内表达需要进行透膜。 物种来源:确定待测样本的种属来源。例如,抗小鼠的抗体,不能用于人的样本的检测
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