胶体金标记-兔抗人IgG(Fc特异性)

胶体金标记物的制备

胶体金标记蛋白质的原理，一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时，蛋白质呈电中性，此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小，但蛋白质分子的表面张力却最大，处于一种微弱的水化状态，较易吸附于金颗粒的表面。由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，而使胶体金处于稳定状态，如果＝低于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电荷，胶体金带负电荷，二者极易静电结合形成大的聚合物。如果pH高于蛋白质等电点时，蛋白质带负电荷，与金颗粒的负电荷相互排斥而不能互相

胶体金标记技术

银染色法（Dot-Immuno-Gold-Silver Straining Method，Dot-IGSS），利用NC膜可以与带负电荷的蛋白质产生较强的疏水作用，从而使目标蛋白与NC膜产生较强亲和力的特性，以及NC膜易于被封闭的特点，使用NC膜作为固相载体。先使被FMDV免疫过的牛血清（含FMDV抗体蛋白）与NC膜结合，然后使用合适的封闭液将NC 膜未结合蛋白的位点封闭，再用胶体金标记过的抗FMDV抗体蛋白的二抗与FMDV免疫过的牛血清作用（利用抗原抗体的特异性结合反应），将未特异性结合的蛋白

胶体金标记实验步骤

金颗粒在波长510nm～550nm之间出现最大吸收值峰。用0.02Mol/L pH8.2 PBS液（含1％BSA，0.02％NaN3）将胶体金蛋白试剂作1︰20稀释，OD520＝0.25左右。一般应用液的OD520应为0.2～0.4。（3）金标记蛋白的特异性与敏感性测定：采用微孔滤膜免疫金银染色法（MF－IGSSA）。将可溶性抗原（或抗体）吸附于载体上（滤纸、硝酸纤维膜、微孔滤膜），用胶体金标记的抗体（或抗原）以直接或间接染色法并经银显影来检测相应的抗原或抗体，对金标记蛋白的特异性和敏感性进行鉴定。