胶体金标记-兔抗鸡IgY (IgG)(H+L)

胶体金标记物的制备

金溶液选用15000r/min 4℃离心15min，吸出上清，弃去沉淀，以去除大的聚合物。 （2）一般在10nm以上所标记的胶体金均可在调整离心机上离心，小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心，在4℃离心1h左右，弃上清，将沉淀以原体积的0.02mol./L TBSpH8.2（内含1%BSA，0.05%叠氮钠）溶解，重复离心2～3次，沉淀溶于原体积的1/10TBS中。4℃保存备用。为了得到颗粒均匀一致的免疫金试剂，上述粗提制剂可用10%～30%蔗糖或甘油溶液作密度梯度离心，分带收集不同大小颗粒的胶体金标记

胶体金标记实验步骤

梯度离心，分带收集不同梯度的胶体金与蛋白的结合物。（2）凝胶过滤法：此法只适用于以BSA作稳定剂的胶体金蛋白结合物的纯化。将胶体金蛋白结合物装入透析袋，在硅胶中脱水浓缩至原体积的1／5～1／10.再经1 500r/min离心20min.取上清加至Sephacryl S-400（丙烯葡聚糖凝胶S-400）层析柱分别纯化。层析柱为0.8 cm×20cm，加样量为床体积的1／10，以0.02Mol/L PBS液洗脱（内含0.1％BSA，0.05％NaN3，pH8.2者用IgG标记物），流速为8ml/h.按红色深浅

E L I S A w i t h p l a t e l e t s

for 1 hour with a 1 :1000 dilution of rat IgG2 a anti-mouse kappa chain monoclonal antibody conjugated to horse-radish peroxidase (LO-MK1 , LO/IMEX) reveal with o-phenylenediamine dihydrochloride (OPD) in revelation solution. SOLUTIONS