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- Boyao
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- 2025年07月08日
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文献和实验Mol/L PBS 含0.05% Tween 203. 封闭液： 3%BSA（用洗涤液配制）4. 酶标抗体的稀释：用封闭液稀释5. OPD底物Buffer：Na2HPO4.12H2O 1.84g柠檬酸 0.51gDDW 100ml6. 显色液（现配现用）：底物Buffer 10mlOPD 2mg30% H2O2 2ml7. 终止液 2Mol/L H2SO48. 重组人TFAR19, HRP标记的羊抗人IgG9. ELISA板, Tip, 移液器，ELISAReader（OD490nm），洗板机操作
蛋白质印迹免疫分析（Western Blot Anglysis）
自显影或原位酶反应来确定抗原—抗体—抗抗体复合物在滤膜上的位置和丰度。 【器材】 转移电泳仪 ，硝酸纤维素膜，滤纸，剪刀，手套，小尺 【 试剂 】 1．IgG 标准品 2．羊抗人辣根过氧化物酶（HRP）标记的IgG 抗体 3．转移buffer：Tris 3.03g，Gly14.4g，甲醇200ml，加三蒸水至1000ml充分溶解，4℃
－20℃备用。⑦阴性对照血清，进行ELISA测定，取其平均OD值作对照。⑧酶标羊抗人IgG结合物（SAHIgG―HRP）的制备：按过碘酸盐改良法，略加改进标记制成酶标抗体。即HRP8.0ml，22℃较搅20min。加乙二醇6滴，继续搅拌5min，对pH4.2，0.001mol/L醋酸盐缓冲液（用2molHC1调pH）透析过夜，中间换水4次，加羊抗人IgG（上海生物制品研究所产品）14mg，逐滴加pH，1.0mol碳酸盐缓冲液，使pH升到9.0～9.5，室温较搅2h，加硼氢化钠（4mg/ml
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