山羊抗牛血清白蛋白

如何减少免疫组化的背景染色？

我做的是大鼠肾脏 MMP-9 和 PAI-1 的免疫组化染色。MMP-9 为山羊抗鼠的，PAI-1 为兔抗鼠的，均为中山公司产品。选用中山公司相应的二抗试剂盒。反复做了好几批片子可结果总是不尽如人意，背景颜色比较深，难以判断阳性结果。 具体步骤如下： 1、石蜡包埋组织切片 4μm，用的是中山公司的多聚赖氨酸防脱片的玻片，捞片后置 60℃ 烤箱烤片 2-4 小时。 2、半月后，脱蜡水化 3、PBS 液冲洗，3 分钟×3； 4、切片置于 1％triton-x-100

胶体金标记物的制备

结合。为防止蛋白质与胶体金的聚合与沉淀，常用牛血清白蛋白，卵白蛋白，聚乙二醇或明胶作稳定剂。用Sephacryb S—400 （丙烯葡聚糖S—400 ）层析分离纯化胶体金蛋白标记物只适用于以BSA作稳定剂者。一、待标记蛋白质的准备（1）透析除盐：蛋白质溶液内应除去多余的电解质，不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位，影响蛋白质的吸附，因此，标记之前必须彻底除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水（0.005mol/L NaCl ， pH7.0）透析。（2）去除蛋白质中的

间接法免疫荧光组织化学染色步骤

抗大鼠波形蛋白单克隆抗体，l：200稀释度)，4℃过夜或37℃孵育30分钟，BS漂洗3次，每次5分钟； (7)滴加与第一抗体种属匹配的荧光素标记二抗(如羊抗小鼠FITC-IgG。1：100)，37℃避光孵育30分钟，PBS漂洗3次，每次5分钟； (8)Hoechst 333442复染细胞核15～20分钟(不是必需步骤)； (9)甘油磷酸缓冲液封片，荧光显微镜下镜观察； (10)结果分析：波形蛋白免疫反应阳性细胞胞质呈现绿色荧光，如细胞核复染后可呈现亮蓝色荧光。阴性细胞仅见细胞