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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
44
- 英文名:
Active Interleukin 25 (IL25)
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20度
- 规格:
10µg50µg 200µg 1mg 5mg
| 产品名称 | 人白介素25(IL25)活性蛋白 |
| 货号 | LZ-D7490 |
| 规格 | 10µg50µg 200µg 1mg 5mg |
| 物种 | Homo sapiens (Human,人) 。 |
英文别名:IL17E; IL17-E; Interleukin-17E
物种:Homo sapiens (Human,人) 。
缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性状:冻干粉
纯度:> 97%
等电点:8.6
应用:Cell culture; Activity Assays
规格:10µg50µg 200µg 1mg 5mg
重组蛋白表达体系分析:
(一)原核表达系统
原核表达系统有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统。其中最常用的表达系统主要是大肠杆菌表达系统。卡梅德生物通过每年多达400个原核蛋白制备项目的技术积累拥有一套完整的蛋白表达和纯化方案,为客户提供优质服务。
(二)酵母表达系统
酵母是一种真核微生物,其细胞有表达外源蛋白的能力,可以达到一个相当高的胞密度状态,在酵母中表达外源蛋白可以进行翻译后修饰,如磷酸化和糖基化。由于酵母宿主细胞结合了细菌和高阶生物宿主细胞表达系统的优良特性,当外源蛋白未能成功地在大肠杆菌中表达时,它是一个不错的选择。用于外源蛋白表达的酵母菌株包括酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、毕赤酵母和乳酸克鲁维酵母。卡梅德生物拥有丰富的酵母蛋白重组表达、发酵和纯化经验,能够快速为不同客户定制酵母表达策略。
(三)昆虫细胞表达系统
膜蛋白、大分子质量蛋白和蛋白激酶这些很难用细菌表达系统表达的蛋白,在Sf9或High-5等昆虫细胞中实现了表达。在大多数昆虫细胞表达系统中,外源基因通过杆状病毒载体转染宿主细胞,含有目标基因的标记盒通过同源重组并入宿主基因组中。卡梅德生物可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品,免费对客户提供的基因进行序列分析,据Sf9,Sf21,Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。
(四)哺乳动物细胞表达系统
当含有复杂二硫键或翻译后修饰的靶蛋白不能使用其他表达系统表达时,哺乳动物细胞可表达外源蛋白。常用的外源蛋白表达的哺乳动物细胞系包括海拉(Hela)细胞、人胚肾细胞(HEK293)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。卡梅德生物建立了完善的哺乳表达体系,包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系,配合卡梅德设计的高表达载体(含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列),能够为客户提供更高表达水平的重组蛋白哺乳动物细胞表达与制备。
| SEC63域内含蛋白1抗体 Anti-HFM1 WB IHC-P IHC-F IF | KYNU重组小鼠 KYNU / Kynureninase 蛋白 (His 标签) Protein |
| γ-谷氨酰转肽酶7轻链抗体 Anti-GGT7 light chain WB IHC-P IHC-F IF | TGFβ诱导早期应答基因1(TIEG1)重组蛋白 Recombinant TGF Beta Inducible Early Response Gene 1 (TIEG1) |
| 糖原合酶激酶3α+β抗体 Anti-GSK3 Alpha + Beta WB IHC-P IHC-F IF | RUVBL1重组人 RUVBL1 / RVB1 蛋白 (His 标签) Protein |
| G2期/S期应答相关蛋白1抗体 Anti-GTSE-1 WB IHC-P IHC-F IF | BLK Protein Human 重组人 BLK / B Lymphocyte Kinase 蛋白 (GST 标签) |
| 磷酸化糖原合酶激酶3α/β抗体 Anti-phospho-GSK3 Alpha + Beta WB IHC-P IHC-F IF | MET Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 蛋白 |
| 脑肿瘤,仅供科研 | DPP4重组食蟹猴 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白 Protein |
| 内源性碱性磷酸酶封闭液,仅供科研 | IL23R Protein Human 重组人 IL23R / IL23 Receptor 蛋白 (Fc 标签) |
| 内源性过氧化物酶封闭液,仅供科研 | SCGN重组人 SCGN / Secretagogin 蛋白 (His 标签) Protein |
| 内囊,仅供科研 | FUT8 Protein Hamster 重组仓鼠 FUT8 蛋白 (aa 68-575, His 标签) |
| 内分泌癌组织芯片,仅供科研 | IL2RB重组小鼠 CD122 / IL2RB / IL2 Receptor beta 蛋白 (His 标签) Protein |
| 肿瘤/睾丸抗原抗体81抗体 Anti-ARMC3 WB IHC-P IHC-F IF | IL1RAPL1 (Interleukin 1 receptor accessory protein-like 1 0.5mgIL1RAPL1 (Interleukin 1 receptor accessory protein-like 1) 白介素受体相关蛋白样1前体蛋白(抗原) |
| 锚蛋白重复结构域蛋白9抗体 Anti-ANKRD9 WB IHC-P IHC-F IF | PROCR Protein Mouse 重组小鼠 Epcr / PROCR 蛋白 (Fc 标签) |
| 脂肪特定转录因子2抗体 Anti-APM2 WB IHC-P IHC-F IF | GRK6 Protein Human 重组人 GRK6 / GPRK6 蛋白 (His & GST 标签) |
| 锚蛋白重复及SAM结构域蛋白1A抗体 Anti-ANKS1A WB IHC-P IHC-F IF | 人白介素25(IL25)活性蛋白CALCB重组人 CALCB / CGPR / Calcitonin 2 蛋白 (Fc 标签) Protein |
| 载脂蛋白L3抗体 Anti-APOL3 WB IHC-P IHC-F IF | 肝细胞癌相关蛋白1(HCRP1)重组蛋白 Recombinant Hepatocellular Carcinoma Related Protein 1 (HCRP1) |
天然蛋白质关键参数有哪些?
IPTG浓度
有可能,宿主中的蛋白表达将通过lac操纵子系统操作。这个系统的详细解释可以在别处找到,你加入异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),一种乳糖类似物,控制蛋白的表达。蛋白的表达应处于生长的对数期,即当溶液的波长600(OD 600)处的光密度达到0.4-0.6。 如果你的目标是可溶性蛋白质,最好不要改变细胞中蛋白的折叠功能。已经假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侣的存在。因此,使用高浓度的IPTG(> 1mM)可能不总是产生的结果。尝试几个不同的浓度,看看哪一个给你最高的可溶性蛋白的产量。
温度
偶尔,你可以在37°C的典型温度下,通过生长和诱导分离可溶性形式的蛋白质,但通常情况下,溶解度在较低温度下增强。可尝试在30°C,25°C和18°C下进行诱导。 注意:如果首先在37℃生长,先让培养物冷却到诱导温度,再加入IPTG。
诱导时间
更长并不总是更好。对于对宿主有毒的蛋白尤其如此。在诱导期间,每隔几个小时取样,并检查目的蛋白的表达。典型的诱导时间根据温度而变化:对于37℃,尝试4小时;对于30℃,进行5-6小时,并且任何低于25℃的温度应该允许生长过夜。
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文献和实验的选择。Kohl等(2008)也发现只要在20-25℃诱导表达,NusA标签能够大大提高难表达的蛋白比如膜蛋白的可溶性。与Korf等的研究结果一致,Kohl等也发现25℃诱导表达比30℃或37℃诱导表达可以纯化得到更多的NusA融合蛋白。 切除NusA标签获得后保持活性且正确折叠的蛋白 表2总结了16个采用NusA标签成功获得可溶性蛋白,在切除标签后这些蛋白仍有正确折叠结构和活性。大部分这种研究是是关于分子量小于或接近20kDa的目标蛋白。纯化
%(casein),4-16%(casein)30-200 kDa2个月90分钟利用casein 和gelatin作为底物,确定特别活性蛋白酶。表2 获得最佳结果的推荐上样量聚丙烯酰胺凝胶1孔IPG孔2D孔5孔9孔10孔12孔15孔17孔最大上样量/孔1.0 mm厚度700 µl7 cm IPG条400 µl60 µl28 µl25 µl20 µl15 µl15 µl1.5 mm厚度n/an/a600 µln/an/a37 µln/a25 µln/a推荐获得最佳分辨率的最大上样量*每条蛋白带,考马斯亮兰染色
很多新手在问做原核表达需要考虑的载体和菌株的选择,现系统地解答一下,供新手借鉴。
通过大量系统筛选而得到的一种过量表达时具有极高溶解性的大肠杆菌蛋白 --Nus.Tag 融合伴侣,从而进一步提高了目标蛋白的可溶性。此外, trxB 突变株 AD494 和 BL21 trxB ,或 trxB/gor OrigamiTM 和 OrigamiB 菌株可用于在胞浆中形成许多真核蛋白正确折迭和活性所要求的二硫键。低温诱导( 15 -25 ° C )也可增加可溶性目标蛋白的比例。 获得可溶性活性蛋白的另一策略是使蛋白外泌到胞外周质中,为折迭和二硫键形成有更适宜的环境。为了达到这一目
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