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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
28
- 英文名:
Recombinant Growth Differentiation Factor 5 (GDF5)
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20度
- 规格:
10µg50µg 200µg 1mg 5mg
IPTG浓度
有可能,宿主中的蛋白表达将通过lac操纵子系统操作。这个系统的详细解释可以在别处找到,你加入异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),一种乳糖类似物,控制蛋白的表达。蛋白的表达应处于生长的对数期,即当溶液的波长600(OD 600)处的光密度达到0.4-0.6。 如果你的目标是可溶性蛋白质,最好不要改变细胞中蛋白的折叠功能。已经假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侣的存在。因此,使用高浓度的IPTG(> 1mM)可能不总是产生的结果。尝试几个不同的浓度,看看哪一个给你最高的可溶性蛋白的产量。
温度
偶尔,你可以在37°C的典型温度下,通过生长和诱导分离可溶性形式的蛋白质,但通常情况下,溶解度在较低温度下增强。可尝试在30°C,25°C和18°C下进行诱导。 注意:如果首先在37℃生长,先让培养物冷却到诱导温度,再加入IPTG。
诱导时间
更长并不总是更好。对于对宿主有毒的蛋白尤其如此。在诱导期间,每隔几个小时取样,并检查目的蛋白的表达。典型的诱导时间根据温度而变化:对于37℃,尝试4小时;对于30℃,进行5-6小时,并且任何低于25℃的温度应该允许生长过夜。
| 产品名称 | 人生长分化因子5(GDF5)重组蛋白 |
| 货号 | LZ-D6943 |
| 规格 | 10µg50µg 200µg 1mg 5mg |
| 物种 | Homo sapiens (Human,人) |
英文别名:CDMP1; LAP4; SYNS2; BMP14; Radotermin; Cartilage-Derived Morphogenetic Protein-1; Bone morphogenetic protein 14; Lipopolysaccharide-associated protein 4
物种:Homo sapiens (Human,人)
来源:原核表达
宿主:E.coli
内毒素水平:<1.0EU per 1μg (determined by the LAL method).
亚细胞定位:分泌
预测分子量:15.1kDa
实际分子量:18kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:Ala382~Arg501 with N-terminal His Tag
缓冲液成份:PBS, pH7.4, containing 0.05% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose and Proclin300.
性状:冻干粉
纯度:> 97%
等电点:6.5
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格:10µg50µg 200µg 1mg 5mg
重组蛋白表达体系分析:
(一)原核表达系统
原核表达系统有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统。其中最常用的表达系统主要是大肠杆菌表达系统。卡梅德生物通过每年多达400个原核蛋白制备项目的技术积累拥有一套完整的蛋白表达和纯化方案,为客户提供优质服务。
(二)酵母表达系统
酵母是一种真核微生物,其细胞有表达外源蛋白的能力,可以达到一个相当高的胞密度状态,在酵母中表达外源蛋白可以进行翻译后修饰,如磷酸化和糖基化。由于酵母宿主细胞结合了细菌和高阶生物宿主细胞表达系统的优良特性,当外源蛋白未能成功地在大肠杆菌中表达时,它是一个不错的选择。用于外源蛋白表达的酵母菌株包括酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、毕赤酵母和乳酸克鲁维酵母。卡梅德生物拥有丰富的酵母蛋白重组表达、发酵和纯化经验,能够快速为不同客户定制酵母表达策略。
(三)昆虫细胞表达系统
膜蛋白、大分子质量蛋白和蛋白激酶这些很难用细菌表达系统表达的蛋白,在Sf9或High-5等昆虫细胞中实现了表达。在大多数昆虫细胞表达系统中,外源基因通过杆状病毒载体转染宿主细胞,含有目标基因的标记盒通过同源重组并入宿主基因组中。卡梅德生物可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品,免费对客户提供的基因进行序列分析,据Sf9,Sf21,Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。
(四)哺乳动物细胞表达系统
当含有复杂二硫键或翻译后修饰的靶蛋白不能使用其他表达系统表达时,哺乳动物细胞可表达外源蛋白。常用的外源蛋白表达的哺乳动物细胞系包括海拉(Hela)细胞、人胚肾细胞(HEK293)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。卡梅德生物建立了完善的哺乳表达体系,包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系,配合卡梅德设计的高表达载体(含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列),能够为客户提供更高表达水平的重组蛋白哺乳动物细胞表达与制备。
| HumanPyridinolinecrosslinks,PYDELISAKit人胶原交联(PYD)ELISA试剂盒规格:96T/48T | CXADR重组小鼠 CXADR 蛋白 (His 标签) Protein |
| 大鼠己糖激酶1(HK1)ELISA试剂盒 ,英文名: HK1 ELISA Kit | FCGR2B Protein Human 重组人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 标签), Biotinylated |
| Mouse tumor necrosis factor soluble receptor II (TNFsR- II) ELISA Kit 小鼠坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒 | AGER重组人 AGER / RAGE 蛋白 (His 标签) Protein |
| Ratai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgAELISAKit 大鼠抗肌内膜抗体IgA(EMAIgA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 | TNFSF9 Protein Rat 重组大鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (His 标签) |
| CLIAKitforFE(Humanferritin)ELISAKit人铁蛋白规格:48T/96T | Adipo R1(adiponectin receptor 1 0.5mgAdipo R1(adiponectin receptor 1) 脂联素受体-1(抗原) |
| Rat platelet derived growth factor (PDGF) ELISA Kit 大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒 | SFN Protein Human 重组人 14-3-3 sigma / Stratifin / YWHAS 蛋白 (GST 标签) |
| HumanComplemefragme3c,C3cELISAKit 人补体片段3c(C3c)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 | LRRC3B重组人 LRRC3B / LRP15 蛋白 (Fc 标签) Protein |
| HumanFibronectin,FNELISA试剂盒人纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒规格:96T/48T | CD8A Protein Mouse 重组小鼠 CD8a / Lyt2 蛋白 (His 标签) |
| 组织艾滋病毒1蛋白酶(HIV-1PROTEASE)活性荧光淬灭法定量检测试剂盒20次 | TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor 0.5mgTSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT) 促甲状腺素受体(抗原) |
| Humanniicoxide,NOELISAKit人(NO)ELISA试剂盒规格:96T/48T | Western转膜液(粉剂) 10*1L |
| 牛腺病毒(ADV)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 | MSR1重组大鼠 MSR1 / SCARA1 蛋白 (His 标签) Protein |
| 人组织蛋白酶H(CTSH)免疫试剂盒 Human cathepsin H,CTSH ELISA kit | Cx40 (Connexin-40 0.5mgCx40 (Connexin-40) 间隙连接蛋白40(多肽) |
| Ratai-endothelialcellaibody,AECAELISA试剂盒大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒规格:96T/48T | BSG Protein Human 重组人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 蛋白 (His 标签) |
| 免疫反应性生长激素(irGH)ELISA试剂盒 ,英文名: irGH ELISA Kit | 人生长分化因子5(GDF5)重组蛋白MAPK14重组人 p38 alpha / MAPK14 蛋白 (His 标签) Protein |
| Humancholecystokininoctapeptide,CCK-8ELISA试剂盒人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)ELISA试剂盒规格:96T/48T | 组织金属蛋白酶抑制因子4(TIMP4)重组蛋白 Recombinant Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 4 (TIMP4) |
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文献和实验牢记N端法则:当N端第二个残基是Leu、Arg、Lys、Phe、Tyr和Trp时,重组蛋白半衰期只有2分钟,而小侧链的氨基酸残基,如Ala,则可以提高蛋白稳定性。因此在设计载体时,要特别注意第二个密码子,避免上述残基的出现。处理高毒性蛋白:毒性极高的重组蛋白,其本底表达就会杀死原核宿主,质粒容易丢失,使其在大肠杆菌中很难得到高表达。采用可表达T7溶菌酶的宿主。T7溶菌酶是T7RNA聚合酶的抑制剂,采用含有T7溶菌酶质粒的宿主,如pLysS,可以降低重组蛋白在大肠杆菌快速生长期的本底
重组菌的生长温度,降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法,较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用,从而可减少包涵体的形成[4]。 2、 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂,培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应,在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输,其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇(诱导热休克蛋白的表达)、低分子量的巯基或二硫化合物(影响细胞周质的还原态,从而影响
1 介绍用于生产治疗性重组蛋白的哺乳动物补料批次细胞培养物的性能和产量取决于细胞对变化的培养环境的反应。广泛报道的一种提高哺乳动物细胞生产力的策略是基于在高渗条件下培养细胞的。例如,通过加入无机或有机渗透剂(如 NaCl 或山梨糖醇)来增加渗透压。但是,细胞比生产率的提高与细胞生长的降低相结合,通常不会在产品产量方面带来整体收益。双相分批培养或逐渐增加渗透压、渗透保护成分和随后的继代培养已被成功地用于克服细胞生长抑制的问题。然而,这些研究大多数是在分批条件下进行的,高渗透压对补料批次培养的影响
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