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文献和实验大阪大学蛋白质研究所藤井勇树、高木淳一东北大学大学院医学系研究科金子美华、加藤幸成 前言在分析蛋白质的功能时最重要的是如何得到高纯度的蛋白。现今提纯蛋白最常用的方法是亲和标签系统。被统称为「Epitope Tag」的肽标签以及其单克隆抗体组成的系统有FLAG、HA、Myc等多种标签。但是,每个标签系统都有优缺点,并不存在完美的标签系统。于是,在克服了众多难关后我们终于开发出有超高亲和性的新型亲和标签系统“PA Tag System”1)。 PA tag的起源Epitope Tag
先介绍一下His Tag,为5-15 His 串在一起的小肽, 在表达纯化中用的较为普遍的一种Tag, 从本质上说它是一种亲和性Tag,但也个案证明其也能做一些兼职工作:增加蛋白可溶性,提高蛋白稳定性。但它的本质工作是与IMAC亲和,使纯化过程变的更加程序化,更具可控性。 相对与其他亲和Tag,如 GST, Flag, Strep, 它的特点可谓鲜明: 一,小,浓缩的都是精华,6个His 放在一起约2.5KD大小。His 的等电点为7.6,在常用的纯化缓冲体系(pH 8.0)中
Strep/FLAG Tandem Affinity Purification (SF‐TAP) to Study Protein Interactions
a methodological workflow based on an SF?TAP tag comprising a doublet Strep?tag II and a FLAG moiety optimized for rapid as well as efficient tandem affinity purification of native proteins and protein complexes in higher eukaryotic cells. Depending
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