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文献和实验olivial 最近想做caspase-3的WB,但关于caspase-3的活化有一个问题一直没弄明白,想请教。 在没受刺激前,细胞内的caspase-3以procaspase的形式存在,当受到内外源性刺激时,被活化成异二聚体,该异二聚体由p12和p17两个亚基组成。但procaspase是怎样变成异二聚体的呢?是self-cleavage,还是上游信号如caspase-8、9裂解的? selenium
Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基(17KD)和两个小亚基(12KD)组成,裂解相应的胞浆胞核底物,最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞,caspase-3的活性明显下降。1、Western blot 分析Procaspase-3的活化,以及活化
基和 p12 小亚基片段。p17 和 p12 会二聚化,从而形成最终活化形式的 cleaved caspase-3[5,6] 。图一 Caspase-3 活化示意图(图片源自文献 Zhiyong Han et al. (1997) J. Biol. Chem. 272, 13432–13436)凋亡过程中最重要的事件之一即是 caspase-3 的活化,因此 cleaved caspase-3 的检测是凋亡研究中的常用手段。但在以往的技术咨询中我们发现不少老师在检测 cleaved caspase-3 时
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