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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
21
- 英文名:
Recombinant Kelch Domain Containing Protein 2 (KLHDC2)
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20度
- 规格:
10µg50µg 200µg 1mg 5mg
商品参数
| 产品名称 | 人含Kelch域蛋白2(KLHDC2)重组蛋白 |
| 货号 | LZ-D6322 |
| 规格 | 10µg50µg 200µg 1mg 5mg |
| 物种 | Homo sapiens (Human,人) |
英文名称:Recombinant Kelch Domain Containing Protein 2 (KLHDC2)
英文名称别名:HCLP-1; LCP; HCA33; Hepatocellular carcinoma-associated antigen 33; Host cell factor homolog LCP; Host cell factor-like protein 1
物种:Homo sapiens (Human,人)

来源:原核表达
宿主:E.coli
内毒素水平:<1.0EU/µg(LAL法测定)
亚细胞定位:细胞核
预测分子量:35.4kDa
实际分子量:35kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:Met1~Asp279 with N-terminal His Tag
缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl
缓冲液:(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)

性状:冻干粉
纯度:> 95%
等电点:5.7
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格:10µg50µg 200µg 1mg 5mg



天然蛋白质关键参数有哪些?
IPTG浓度
有可能,宿主中的蛋白表达将通过lac操纵子系统操作。这个系统的详细解释可以在别处找到,你加入异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),一种乳糖类似物,控制蛋白的表达。蛋白的表达应处于生长的对数期,即当溶液的波长600(OD 600)处的光密度达到0.4-0.6。 如果你的目标是可溶性蛋白质,最好不要改变细胞中蛋白的折叠功能。已经假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侣的存在。因此,使用高浓度的IPTG(> 1mM)可能不总是产生的结果。尝试几个不同的浓度,看看哪一个给你最高的可溶性蛋白的产量。
温度
偶尔,你可以在37°C的典型温度下,通过生长和诱导分离可溶性形式的蛋白质,但通常情况下,溶解度在较低温度下增强。可尝试在30°C,25°C和18°C下进行诱导。 注意:如果首先在37℃生长,先让培养物冷却到诱导温度,再加入IPTG。
诱导时间
更长并不总是更好。对于对宿主有毒的蛋白尤其如此。在诱导期间,每隔几个小时取样,并检查目的蛋白的表达。典型的诱导时间根据温度而变化:对于37℃,尝试4小时;对于30℃,进行5-6小时,并且任何低于25℃的温度应该允许生长过夜。
| 波斯坦沙门氏菌 | 烟曲霉探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 博代氏杆菌属 | 赭曲霉探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 博伊丁假丝酵母 | 曲霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 彩色豆马勃 | 奥叶兹基氏病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 糙孢曲霉 | 禽腺病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 草本枝孢 | 禽类支原体通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 草螺菌属 | 禽致病性大肠杆菌1血清型探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 草酸青霉 | 鸟类多瘤病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 侧孢短芽孢杆菌 | 副鸡禽杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 侧孢短芽胞杆菌 | 疱疹病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产氨棒杆菌 | 牛巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产肠毒素大肠埃希氏菌 | 犬巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产氮假单胞菌 | 马巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产红青霉 | 吉氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产黄青霉 | 大巴贝虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产黄纤维单胞菌 | 莫氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产碱假单胞菌 | 鲍曼不动杆菌PCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
| 产碱普罗威登斯菌 | 亨德拉病毒PCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
| 产酶溶杆菌产酶亚种 | 探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产气肠杆菌 | 33蜡状芽孢杆菌33探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产气荚膜梭菌 毒素A型 | 柯萨奇病毒A16型PCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
| 产酸克雷伯氏菌 | 地衣形芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 产紫青霉 | 芽孢杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 肠产毒性大肠埃希氏菌 | 流感病毒H15亚型PCR检测试剂盒(荧光PCR法) |
| 肠膜明串珠菌 | 人含Kelch域蛋白2(KLHDC2)重组蛋白拟杆菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 |
| 肠侵袭性大肠埃希氏菌 | 中肠腺坏死杆状病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 |
重组蛋白表达体系分析:
(一)原核表达系统
原核表达系统有大肠杆菌表达系统、芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统。其中最常用的表达系统主要是大肠杆菌表达系统。卡梅德生物通过每年多达400个原核蛋白制备项目的技术积累拥有一套完整的蛋白表达和纯化方案,为客户提供优质服务。
(二)酵母表达系统
酵母是一种真核微生物,其细胞有表达外源蛋白的能力,可以达到一个相当高的胞密度状态,在酵母中表达外源蛋白可以进行翻译后修饰,如磷酸化和糖基化。由于酵母宿主细胞结合了细菌和高阶生物宿主细胞表达系统的优良特性,当外源蛋白未能成功地在大肠杆菌中表达时,它是一个不错的选择。用于外源蛋白表达的酵母菌株包括酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、毕赤酵母和乳酸克鲁维酵母。卡梅德生物拥有丰富的酵母蛋白重组表达、发酵和纯化经验,能够快速为不同客户定制酵母表达策略。
(三)昆虫细胞表达系统
膜蛋白、大分子质量蛋白和蛋白激酶这些很难用细菌表达系统表达的蛋白,在Sf9或High-5等昆虫细胞中实现了表达。在大多数昆虫细胞表达系统中,外源基因通过杆状病毒载体转染宿主细胞,含有目标基因的标记盒通过同源重组并入宿主基因组中。卡梅德生物可以提供纯度高达95%的全长膜蛋白定制产品,免费对客户提供的基因进行序列分析,据Sf9,Sf21,Hi-5及S2昆虫细胞的密码子偏爱性,免费为您进行密码子优化,从而有效提高重组蛋白表达量。
(四)哺乳动物细胞表达系统
当含有复杂二硫键或翻译后修饰的靶蛋白不能使用其他表达系统表达时,哺乳动物细胞可表达外源蛋白。常用的外源蛋白表达的哺乳动物细胞系包括海拉(Hela)细胞、人胚肾细胞(HEK293)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。卡梅德生物建立了完善的哺乳表达体系,包括但不限于FreeStyle 293-F cell line和Expi CHO-S等细胞系,配合卡梅德设计的高表达载体(含有全长的CMV启动子以及优化后的分泌信号肽序列),能够为客户提供更高表达水平的重组蛋白哺乳动物细胞表达与制备。
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文献和实验近年来,重组蛋白的应用有了显著增长,与此同时,用于重组蛋白表达和纯化的技术和产品也得以增长。自从亲和标签融合技术出现以来,多种多样的短肽或蛋白亲和标签极大地方便了外源表达重组蛋白的分离与蛋白质复合体的纯化,已成为蛋白质研究领域不可或缺的工具。多聚组氨酸标签(His-tag)是目前高通量蛋白纯化最普遍使用的亲和标签,His 标签融合蛋白的固定化金属离子亲和层析(immobilized metal-ion affinity chromatography, IMAC)被作为主要的蛋白纯化方法。从重组蛋白
一. 实验目的1. 掌握重组蛋白诱导表达的方法。2. 亲和层析法纯化His 标记的融合蛋白。二. 实验原理将目的基因连接在表达载体后,通过加入诱导剂IPTG诱导目的基因表达。表达载体除具有蛋白表达所需要的启动子外,在终止子前有6个His编码序列,便于蛋白的亲和层析纯化。亲和层析以蛋白质或生物大分子和结合在介质上的配基间的特异亲和力为基础。本实验采用磁座和结合有Ni2+的磁珠在变性或非变性条件下对融合蛋白进行分离纯化,只需通过“结合-清洗-洗脱”三个简单的操作步骤就可完成。该系统可根据样本量灵活
因子或重组蛋白溶液加入到培养体系内即可。 其实,说明书上推荐的浓度对于一般的实验来讲是比较高的。所以用户通常会将该溶液进一步稀释后再放在4℃保存,待1周内用完。如进行稀释,必须遵照下面第4步的方法,即需用含载体蛋白的溶液进行稀释,否则稀释后的细胞因子或重组蛋白很容易会粘附在管壁或瓶壁上,使得溶液中的细胞因子或重组蛋白的浓度下降,细胞因子或重组蛋白的总活性则大为减弱。 第4步:如要长期保存,则需用含载体蛋白(如0.1% BSA,或10% FBS,或5% HSA)的溶液进一步稀释,然后分装冻存
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