Biotin Northern Blot Kit (for

碧云天生产的Biotin Northern Blot Kit (for Small RNA)，即生物素Northern小RNA检测试剂盒或生物素标记探针小RNA Northern Blot检测试剂盒，包含了基于生物素标记探针进行Northern检测所需的凝胶制备、上样、电泳、转膜、预杂交和杂交、膜的洗涤、生物素标记探针的化学发光检测等一系列试剂，为基于生物素标记探针的小RNA Northern检测提供了比较完整的解决方案，使非常繁琐的小RNA Northern检测变得相对比较简单易行。

本试剂盒使用了BeyoHyb™ Quick Hybridization Solution，仅需2小时就可以完成探针的高效杂交。

本试剂盒提供了超高灵敏度的化学发光检测试剂BeyoECL Moon，可以借助Streptavidin-HRP和生物素标记探针的结合，实现Northern的超高灵敏度检测。

本试剂盒提供的Northern快速超敏杂交液，含有独特的杂交加速试剂(hybridization accelerator)，可以大大提高杂交速度和检测灵敏度，通常杂交2h即可达到杂交过夜的效果。本产品用于Northern检测小鼠肝脏总RNA中tRNA-Ala或miRNA-122的效果参考图1，仅1ng或0.5μg的总RNA样品通过2h的杂交就可以获得和杂交过夜基本一致的良好检测信号。

图1.使用碧云天生产的Biotin Northern Blot Kit (for Small RNA) (R0220)进行Northern检测时，分别杂交2h和杂交过夜(overnight)的检测效果图。实验样品为小鼠肝脏组织中提取的总RNA，使用3’端生物素标记的Oligo探针检测。检测mouse-tRNA-Ala-TGC-3-1的探针为5’-TGGAGATGCCGGGGATCGAACC-Biotin-3’，检测mouse-microRNA-122的探针为5’-CAAACACCATTGTCACACTCCA-Biotin-3’。实际检测效果会因为实验条件的不同而有所不同，图中效果仅供参考。

Northern检测方法在1977年由斯坦福大学James Alwine、David Kemp和George Stark发明，可用于检测RNA的大小、丰度和电泳时的迁移位置等[1, 2]。由于DNA Blot以其发明人Edwin Southern的名字命名为“Southern Blot”，与其类似的RNA Blot因此被命名为“Northern Blot” [1, 2]。Northern Blot包括以下主要步骤：RNA样品的分离与纯化，RNA样品的变性或非变性凝胶电泳，将凝胶中的RNA样品转印至尼龙膜或硝酸纤维素膜上，预杂交，与带有标记的特异核酸探针(DNA或RNA探针)杂交，最后经放射自显影、化学发光或显色的方法进行探针的检测[1, 2]。其中基于化学发光的Northern检测，灵敏度非常高，又无需接触对于人体有伤害的放射性同位素，目前被广泛使用。

Northern检测用于定性和定量检测目的RNA时，比qPCR或高通量测序要繁琐很多。Northern相对于qPCR和高通量测序，最大的优势是可以通过印迹检测确定目的RNA的长度或者说是电泳时的迁移位置，并且不受小RNA末端修饰的影响[2, 3]。qPCR很难确定目的RNA的长度，高通量测序会受读长以及RNA末端修饰的影响[2, 3]。

RNA具有复杂的二级结构，会影响RNA的凝胶电泳分离和鉴定，可在凝胶中加入变性剂如甲醛、乙二醛等，可以破坏RNA的二级结构，从而使RNA分子严格按照电荷迁移的方式得到有效分离。

本试剂盒不包括生物素标记探针制备相关试剂。生物素标记探针的制备，推荐选购碧云天的生物素3’末端DNA标记试剂盒(D3106)以制备生物素标记的Oligonucleotide或DNA探针，或直接合成生物素标记探针。

本试剂盒提供的试剂量基本足够10个100cm²或20个50cm²的印迹膜样品的检测。个别试剂如果需要更多的量，也可以单独向碧云天订购相关产品。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
R0220-1	40% Acr-Bis (19:1, Nuclease free)	80ml
R0220-2	TBE (5X, DNase/RNase free)	500ml
R0220-3	凝胶聚合催化剂	0.5g
R0220-4	TEMED	0.5ml
R0220-5	RNA Loading Buffer (2X)	2ml
R0220-6	BeyoHyb™ Quick Hybridization Solution	250ml
R0220-7	Low Stringency Wash Solution	500ml
R0220-8	High Stringency Wash Solution	500ml
R0220-9	Streptavidin-HRP Conjugate	100μl
R0220-10	BeyoECL Moon A液	55ml
R0220-11	BeyoECL Moon B液	55ml
R0220-12	封闭液	380ml
R0220-13	洗涤液(5X)	250ml
R0220-14	检测平衡液	250ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，一年有效。40% Acr-Bis (19:1, Nuclease free)、BeyoECL Moon A液、BeyoECL Moon B液，可以4℃避光保存，一年有效。TBE (5X, DNase/RNase free)、封闭液、洗涤液(5X)及检测平衡液，可以4℃保存，一年有效。BeyoHyb™ Quick Hybridization Solution、Low Stringency Wash Solution、High Stringency Wash Solution可以室温或4℃保存，至少一年有效。40% Acr-Bis (19:1, Nuclease free)首次解冻后推荐4℃保存。

注意事项：

BeyoHyb™ Quick Hybridization Solution和Low Stringency Wash Solution在较低温度下容易有沉淀析出。如有沉淀出现，可在42℃水浴孵育，并在充分溶解后使用。

需自备带正电荷尼龙膜、转印滤纸、转印吸水纸、杂交袋或杂交管、甲醛等材料和试剂。推荐选购碧云天的尼龙膜(带正电荷) (FFN10/FFN11/FFN13/FFN15)、转印滤纸(7.5×10cm) (FFP51)、转印吸水纸(FFP56)。

电泳和转膜推荐使用碧云天的E6150 MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(2胶/2膜)、E6155 MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(4胶/2膜)或E6159 MiniProGel™蛋白制胶、电泳与转膜系统(4胶/4膜)。

实验中用到的吸头、离心管等实验耗材必须为RNase free的，推荐选购碧云天的BeyoGold™系列中无RNase和DNase污染的耗材产品。不含RNase的超纯水推荐使用碧云天的ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)或R0021/R0022 DEPC水(DNase、RNase free)。

试剂盒中的个别组分如果需要更多的量，也可以单独订购碧云天的R0216 DNA/RNA Denaturing Loading Buffer (2X) (可用于替代R0220-3 RNA Loading Buffer (2X))，R0229 BeyoHyb™ Quick Hybridization Solution，R0251 Low Stringency Wash Solution (DNase/RNase free)，R0253 High Stringency Wash Solution (DNase/RNase free)，P0018F BeyoECL Moon (极超敏ECL化学发光试剂盒)，D3308B 封闭液(D3308专用)和D3308W 洗涤液(5X, D3308专用)用于替换试剂盒中的相应试剂。

桌面等环境以及仪器设备表面的RNase、DNase、RNA和DNA的去除推荐使用碧云天的R0127 RNase, DNase, DNA and RNA Away进行快速处理。

RNA Loading Buffer (2X)、BeyoECL Moon A液、BeyoECL Moon B液均对人体有害，操作时请小心，注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

操作过程中，如果膜放置在容器中，需要确保膜的样品面向上。膜的取放推荐使用平头镊，推荐选购碧云天的FS035 WB专用镊子(12cm, 翘方头)，每次取放膜不能触及有样品处。膜的一角可以使用铅笔进行标记或剪掉一小个角进行标记，以确定膜的样品面和上下左右方位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。