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文献和实验于上佳的上样缓冲液中,可产生相等或预期强度的条带,并且不含有条带污点,无染色阴影。与此相反,分子量标准 #1 采用较老技术制造,并存在于次优组分的缓冲液中。 b. 样品和标准品准备 须计算上样到凝胶中的 DNA 量,以确保目的条带良好分离,并用于可视化和检测。虽然用荧光染料足以检测 1 - 100 ng/条带的 DNA,但最小可检测量取决于 所用染料(了解更多: 核酸染色特性)[2]。注意,样品或标准品的超载会造成条带污点并遮盖附近条带,从而导致条带分辨不清,特别是片段大小相似时(图 2A)。 图
即可用RIA测出。 3.ABA的放射免疫测定 所有样液的转移,操作皆在弱光下进行,温育过程在4℃黑暗中进行。平行三管或双管进行标准曲线和样液ABA含量的测定。 本底管(N)、总计数管(T)和零标准管(B0 )分别加入200μl、150μl和50μl PBS液,各标准管(B)由稀至浓地加入50μl不同ABA浓度的标准液,样品管(S)加50μl含F ABA的碱性磷酸盐液或c ABA的磷酸液。接着在B0 管、B管和S管中加入100μl抗体稀释液,涡旋
1) 配胶:12.5%均一SDS聚丙烯酰胺凝胶,单块胶总量100 ml。 2) 灌胶:将配制好的胶液灌入模具中,至顶部3 cm左右。胶面上加入水饱和正丁醇20ul/块。2小时后,可以使用。观察凝胶,确保聚合反应均匀完全,凝胶内部没有气泡,并且凝胶的顶部表面平展。倒掉覆盖在凝胶上的溶液,用凝胶储存液冲洗凝胶表面。 3) 放置IPG胶条和加入分子量标准蛋白:将平衡后的胶条,放置于凝胶的顶部。加入分子量标准蛋白:将上样滤纸片剪成约1 X 2 mm2 ,放在玻璃板上,分子
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