碧云天生产的内毒素检测试剂盒(鲎试剂显色法),即Chromogenic LAL Endotoxin Assay Kit,是一种基于鲎试剂酶促反应原理,通过比色法定量检测细菌内毒素(endotoxin)也称脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)的超高灵敏度、高稳定性、强抗干扰能力的常用试剂盒。检测灵敏度可以低达0.01EU/ml,并且可以检测微量样品,样品的体积可以仅为10微升或更小体积。
本试剂盒首次启用后,适当保存至少在2个月内有效。基于鲎试剂的内毒素检测试剂盒,通常只能配制后立即使用,导致试剂盒的浪费。本试剂盒经过精心优化,确保首次配制成溶液后,按照说明书推荐的方法保存,至少2个月内有效。
本试剂盒检测时间短,样品需求量小。检测试剂加入到待测样品中最快16分钟左右,即可完成显色反应,从而实现简单、快速、高灵敏地检测内毒素含量;不依赖凝固蛋白形成凝胶,抗干扰能力强,可适用于本底颜色为淡黄色的样本,如血浆、血清等;对待测样品消耗量小,每个反应体系仅需使用10μl待测样品;含有偶氮化试剂,检测灵敏度高、测定样品的线性范围宽,并且可避免有色检品自身颜色对检测的干扰[1]。
用途:溶液样品中内毒素污染检测;各种不同类型样品中内毒素含量的定量检测。
原理:鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞裂解物的冷冻干燥品(Lyophilized Amebocyte Lysate, LAL)或体外重组的同类试剂,鲎试剂中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度,pH值及无干扰物质),内毒素激活C因子,引起一系列酶促反应,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解本试剂盒中提供的显色剂,使其分解为多肽和黄色的对·硝·基·苯·胺(pNA,λmax =405nm)。在一定时间内,pNA的生成量与内毒素浓度成正相关。同时,对·硝·基·苯·胺(pNA)也可与偶氮化试剂反应生成玫瑰红色产物(λmax =545nm),据此可以定量待测样品的内毒素浓度,并可避免待测样品本身的颜色对405nm处吸收峰的干扰[2,3]。
检测灵敏度高。最低检测限可以达到0.01EU,可以自行选择的有效检测区间为0.1E -1.0EU/ml或0.01 -0.10EU/ml。具体的检测效果请参考图1。
图1.碧云天生产的内毒素检测试剂盒(鲎试剂显色法) (C0276)检测标准曲线的效果图。取配制好的下列浓度的内毒素标准品溶液:0.000、0.010、0.025、0.050、0.075、0.100EU/ml (A)及0.00、0.10、0.25、0.50、0.75、1.00EU/ml (B)各10μl,用本试剂盒进行显色反应及标准曲线的检测。实际检测时会因检测仪器等实验条件的的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
一个包装的本试剂盒共可以检测160个样品(含标准品)。
包装清单:
保存条件:
4ºC保存,两年有效。内毒素检测试剂溶解后须立即适当分装,-20ºC保存一周有效,经液氮速冻后-80ºC保存至少两个月有效。其余试剂溶解后-20ºC保存,至少6个月有效。
注意事项:
内毒素检测试剂溶解后很不稳定,需要尽量在10分钟内使用完毕或适当分装后保存。因此试剂盒在使用过程中需要预先做好各项准备工作,在需要加入内毒素检测试剂前再溶解内毒素检测试剂,或解冻之前分装冻存的内毒素检测试剂。
实验所用的器皿需经预处理,以去除可能存在的外源性内毒素,常用的方法是在250ºC干烤至少60分钟,也可以采用其它确保不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械,应选用表明无内毒素并且对实验无干扰的器械。
实验操作过程应防止微生物的污染。
溶解并稀释后的内毒素标准品溶液静置时间若超过10分钟,使用前应在旋涡振荡器上振荡混匀1分钟。冻存的溶解后的内毒素标准品,下次使用时须先充分溶解,并剧烈涡旋混合后使用。
本试剂盒中的内毒素检测试剂溶解后,须立即适当分装,-20ºC保存一周有效,经液氮速冻后-80ºC保存至少两个月有效。务必避免反复冻融。
样品的稀释和制备,推荐使用碧云天的无内毒素超纯水ST878 BeyoPure™ Ultrapure Water (Sterile, Endotoxin-Free)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。