彗星电泳试剂盒

碧云天生产的彗星电泳试剂盒(Comet Assay Kit)，也称彗星检测试剂盒、彗星电泳检测试剂盒、彗星电泳DNA损伤检测试剂盒(DNA Damage Comet Assay Kit)，是一种简单、快速、高效的通过电泳检测单细胞DNA损伤的试剂盒。彗星电泳实验也被称为单细胞凝胶电泳检测(Single Cell Gel Electrophoresis Assay, SCGE)，是一种快速检测单细胞DNA损伤的实验方法，因在电泳时观察到的DNA受损细胞形似彗星的图像，故称彗星电泳或彗星试验[1]。

常见的DNA损伤有碱基修饰、DNA链内和链间交联、DNA单链断裂(Single strand-breaks, SSBs)以及DNA双链断裂(Double-strand breaks, DSBs)等，其中DSBs被认为是最严重的DNA损伤。引起DNA产生DSBs的物理或化学因素有紫外线照射、电离辐射(X、γ射线等)、遗传毒性化学物质和化疗药物等。DSBs的无效修复或错误修复可以引发基因组紊乱，最终导致肿瘤及其它相关疾病的发生[2]。

根据DNA损伤的原理，DNA的损伤检测可以分为三类：基于损伤DNA理化性质的改变，如彗星实验；基于分子杂交，如荧光原位杂交法(Fluorescence in situ hybridization, FISH)；基于DNA损伤后形成的产物检测DNA损伤，如检测磷酸化的H2AX、暴露的3'-OH (TUNEL检测)和8-OHdG等。前两种方法是基于荧光标记直接观测DNA的损伤情况，而基于DNA损伤后形成产物检测DNA损伤是通过标记物间接反映DNA的损伤程度。本彗星电泳试剂盒基于荧光标记直接检测DNA的损伤情况，最初由Östling和Johansson在1984年发明，此后由Singh等在1988年改进，此后成为评估DNA损伤与修复、遗传毒性检测常用的标准实验技术[3-6]。

彗星电泳是一种检测真核细胞DNA损伤的常用方法，其检测原理如下。低熔点琼脂糖凝胶具有在37℃下保持溶液状态的特点，可保持细胞的原有状态，不会造成额外的DNA损伤，避免了正常熔点琼脂糖需要更高温度熔解而导致的细胞损伤。因此将细胞包埋在含有低熔点琼脂糖凝胶的载玻片上，细胞经裂解后，正常细胞细胞核中的大分子DNA由于其完整性，在电场作用下迁移速率基本一致，DNA荧光染色仍然能保持细胞核的形态或有非常轻微的拖尾；如果DNA发生单链或双链断裂，在电场作用下，不同分子量的DNA呈现不同的迁移速率，大分子DNA迁移速率较低，而小分子DNA片段迁移速率较快，荧光染色后，大分子DNA仍然呈现细胞核样的形态，形似彗星的头部(Comet head)，小分子DNA呈现逸出细胞核的拖尾形态，形似彗星的尾巴(Comet tail)。DNA损伤越严重，小分子DNA片段就越多并且片段越小，电泳时的迁移速率越快，彗星状拖尾就越长。因此，通过测定彗尾部分的光密度或长度就可定量测定单个细胞DNA损伤程度[6]。使用本试剂盒检测HeLa细胞中DNA损伤的效果参考图1。

图1.碧云天彗星电泳试剂盒(C2041)检测HeLa细胞中DNA损伤的效果图。正常培养条件下的HeLa细胞中(Control)，几乎没有彗星状拖尾，说明DNA很完整；在25μM或50μM Camptothecin (SC0141)诱导1小时后，部分细胞核出现明显的彗尾，说明DNA出现不同程度的损伤。实际染色效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

根据裂解液的差异，彗星电泳可以分为中性彗星电泳和碱性彗星电泳。中性彗星电泳，主要用于检测DNA双链的断裂；碱性彗星电泳，灵敏度更高，可以检测更少量的单双链断裂、DNA的碱性不稳定位点及不完整切除修复引起的DNA链的断裂等。本试剂盒采用了常用的碱性彗星电泳法。

本试剂盒小包装可以检测20个样品，中包装可以检测100个样品。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C2041S-1	Lysis Buffer	200ml
C2041S-2	DMSO	20ml
C2041S-3	Normal Melting Point Agarose	100mg
C2041S-4	Low Melting Point Agarose	70mg
C2041S-5	Propidium Iodide Solution	400μl
－	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
C2041M-1	Lysis Buffer	500ml×2
C2041M-2	DMSO	100ml
C2041M-3	Normal Melting Point Agarose	500mg
C2041M-4	Low Melting Point Agarose	350mg
C2041M-5	Propidium Iodide Solution	2ml
－	说明书	1份

保存条件：

4℃保存，一年有效。其中Propidium Iodide Solution须避光保存。DMSO、Normal Melting Point Agarose、Low Melting Point Agarose也可室温保存。

注意事项：

Lysis Buffer必须完全溶解后再使用，如有沉淀，可37℃水浴充分溶解。

从细胞裂解步骤开始，所有的试剂均应提前在4℃预冷后用于细胞，并在裂解、解旋、电泳、中和过程中保持4℃低温状态及避光，防止诱发额外的DNA损伤。重点注意避免日光、日光灯等中的紫外线对DNA的损伤。

需使用不含钙、镁离子的PBS，推荐使用碧云天的PBS (C0221A)。

DNA损伤的阳性对照可通过一定浓度的Camptothecin (SC0141)、Cisplatin (S1552)和Etoposide (SC0173)等进行诱导，具体可参考碧云天的DNA损伤检测试剂盒(γ-H2AX免疫荧光法) (C2035)，也可以使用100μM过氧化氢或25μM KMn`O₄在4℃处理20分钟。

本试剂盒中Propidium Iodide Solution对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。