BioRT 高灵敏cDNA第一链合成试剂盒 II（需配套特异

反转录过程中需要考虑哪些因素？

为了研究 RNA 的功能，通常需要通过反转录过程将 RNA 转化为更稳定的互补 DNA（cDNA）。之后 cDNA 可通过分子克隆、PCR 和测序等技术做进一步的研究。因此，反转录过程是许多 RNA 实验研究流程的关键步骤。 为了获得更为准确的研究结果，本期总结了反转录过程中需要考虑的一些因素，以期能够抛砖引玉，给你的实验研究带来些许帮助。 本期内容 RNA 模板制备 基因组 DNA 的去除 反转录酶选择 引物选择 主要反应组分 反应温度和反应时间 第一链和第二链 cDNA 合成 注

这几类 PCR 技术你知道吗？

产物的 DNA:RNA 杂交链变性后利用大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ Klenow 片段或反转录酶合成 cDNA 第二链，最后用对单链特异性的 S1 核酸酶消化该环，即可进一步克隆。但自身引导合成法较难控制反应，而且用 S1 核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于 mRNA 5' 端序列出现缺失和重排，因而该方法目前很少使用。 2、置换合成法： 该方法利用第一链在反转录酶作用下产生的 cDNA:mRNA 杂交链不用碱变性，而是在 dNTP 存在下，利用 RNA 酶H在杂交链的 mRNA 链上造成切口

如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准

性，与目的模板竞争引物和酶等，可能导致PCR扩增效率的下降，影响定量结果的准确性；另外，并不是每个基因都能在相邻的且大小合适的外显子上找到合适的跨内含子引物，所以，很大部分实验需要在一个外显子上设计引物，这时就必须经过去除基因组DNA步骤，才能得到准确可靠的结果。 传统基因组DNA去除的方法采用对RNA进行处理，由于引入了蛋白（DNase I），后续需要进行氯仿抽提纯化，操作繁琐，耗时长，RNA的回收率低。TIANGEN公司的FastQuantcDNA第一链合成试剂盒（KR106