JET 一次性加样槽 PCR200200

PCR 问题整理及提高 PCR 扩增特异性的方法总结

buffer，摸索镁离子浓度或适当加入 DMSO（小于 0.3%） · 提高退火温度，增加延伸时间（反应条件参照试剂盒说明书） 问题 2：假阳性 现象：空白对照出现条带 可能原因： · 引物设计不适，与目的序列具有同源性 · 试剂污染：水、移液枪等被核酸污染 · 样品间出现交叉污染 解决方法： · 实验仪器高压灭菌 · 实验试剂（酶除外）高压灭菌，离心管枪头一次性使用 · 规范实验操作 · 假阳性可通过巢式 PCR 解决，或者使用特异性较高的试剂盒扩增 问题 3：拖尾、弥散 现象：电泳出现拖尾、涂抹

PCR专题

PCR 循环扩增区；④PCR 产物鉴定区。 其实验用品及吸样枪应专用。实验前应将实验室用紫外线消毒以破坏残留的DNA 或RNA. 2、吸样枪:吸样枪污染是一个值得注意的问题。由于操作时不慎将样品或模板核酸吸入枪内或粘上枪头是一个严重的污染源，因而加样或吸取模板核酸时要十分小心，吸样要慢，吸样时尽量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或产生气溶胶污染。 3、预混和分装PCR 试剂:所有的PCR 试剂都应小量分装，如有可能，PCR 反应液应预先 配制好，然后小量分装，-20℃保存。以减少重复加样次数

PCR技术综述

和dNTP应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。 (三) 实验操作注意事项  尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意： 1、戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套； 2、使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染； 3、避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅