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逸微健华
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Co-IP质谱检测服务
服务项目简介
免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,简称Co-IP)是一种检测蛋白质与蛋白质相互作用的实验方法,也可以用来发现体内与某已知蛋白有相互作用的新蛋白质。当Co-IP实验中需要确认已知互作蛋白是否是预想的蛋白质,或需要鉴定发现的新的互作蛋白时,可以结合质谱进行分析。Co-IP质谱检测指的就是对Co-IP实验中沉淀下来的蛋白质进行质谱分析以鉴定靶标蛋白的相互作用蛋白。
技术原理
Co-IP与质谱联用的原理是:如果一种目标蛋白是某一蛋白复合物的一部分,利用目标蛋白的特异性抗体,就可以对整个蛋白复合物进行富集,进而利用质谱鉴定这个蛋白复合物中的其他成员。
图1.Co-IP质谱检测技术流程
服务优势
- 相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态。
- 蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响。
- 可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
送样要求
交付结果
- 相互作用蛋白质谱定性鉴定结果,定量分析;
- 完整的实验步骤、使用仪器、试剂来源、软件检索参数等。
15个工作日
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文献和实验某个实验间隙… 萌新:开题报告已提交,转眼 1 个月过去了,实验还是一头雾水,为啥我的 co-IP 拉不下来蛋白? 奋斗中的师兄:我当初正好相反,拉下来的蛋白被抗体条带覆盖住了,换个抗体忒不好找,无奈换了个蛋白,还好挺顺利。 大师兄:蛋白吧,不但种类多,理化性质差异较大,关键它们又喜欢组队在细胞里干活,IP、co-IP 又是常用的手段,掌握好这个工具还是很重要的,总不能随随便便就换个蛋白。 那要怎么快速掌握这项实验,轻松搞定各种疑难杂症呢? 我们依据三十多年的 IP/co-IP 实验经验,总结
紫叶竹韵 做IP,之后Western 分析,看到有两条带,在25和50KD左右,应该是抗体的两条带,但是我的目的蛋白也是52KD的,这该怎么区分呢。 woxingwosu 最好是选择与做IP不同来源的抗体来做(比如说IP用鼠的抗体,WB就用兔的抗体),这样就不会检测到抗体的两条带。 如果没有不同来源的抗体的话,就要做IP的时候尽量少放点抗体,跑胶跑得远一点,使得目的蛋白能够被看到,不过由于你的蛋白是在是太接近重链
一、原理: 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法,基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育,促进免疫复合物的形成;随后加入能够与抗体Fc段结合的proreinA/G(预先结合固化在琼脂糖小珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物,纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白,应用Westernblot或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。 与其它研究方法相比,免疫
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