马铃薯病毒Y型RT-PCR试剂盒

马铃薯病毒Y型RT-PCR试剂盒
产品及特点： 
马铃薯 Y 病毒病又称烟草脉带病、烟草脉斑病毒病。由于病毒株系不同而表现出不同症状。主要有脉带花叶型、脉斑型和褪绿斑点型。脉带型在烟株上部叶片呈黄绿花叶斑驳，脉间色浅，叶脉两侧深绿，形成明显的脉带，严重时出现卷叶或灼斑，叶片成熟不正常，色泽不均，品质下降，烟株矮化。脉斑型下部叶片发病，叶片黄褐，主侧脉从叶基开始呈灰黑或红褐色坏死，叶柄脆，摘下可见维管束变褐，茎秆上现红褐或黑色坏死条纹。褪绿斑点型初期与脉带型相似，但上部叶片现褪绿斑点，后中下部叶产生褐色或白色小坏死斑，病斑不规则，严重时整叶斑点密集，形成穿孔或脱落。马铃薯 Y 病毒病：烟株发病初期出现明脉，不久形成花叶型的斑驳，随后小叶脉间颜色变淡，叶脉两侧的组织呈深绿色带状。受坏死株系侵染的病株，叶脉呈褐色至黑色坏死。本产品是根据 PCR 原理开发的马铃薯病毒 Y 型检测的试剂盒。
1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2. 根据马铃薯病毒Y型的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到1000拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够50次20μL体系的RT-PCR。
6. 本产品由酶联生物提供，不得用于临床诊断。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黄盖）
试剂二	MMLV-Taq Mix	75 μL（红盖)
试剂三	超纯水	1 mL（亮黄盖）
试剂四	马铃薯病毒Y型RT-PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂五	马铃薯病毒Y型RT-PCR阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂六	使用手册	1 份

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。 
运输及保存： 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂： 样品 RNA。
马铃薯病毒Y型RT-PCR试剂盒
使用方法：  
一、样品 RNA 的制备： 
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL马铃薯病毒Y型PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒RNAout。
二、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系）：  
3. 如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR阳
性对照，另一个是RT-PCR 阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：

成份	N+2 个 样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×双酶一管式RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
马铃薯病毒Y型RT-PCR引物混合液	各 2 μL	2μL	2μL
N+2个制备的 RNA 样品	各 12.5μL	--	--
超纯水	--	12.5μL	--
马铃薯病毒Y型RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液	--	--	12.5μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环）	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测： 
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。