Biospin 无内毒素质粒DNA中量快速提取试剂盒5

【原创】质粒制备原理及常见问题

程度等等。 现在大部分质粒提取都用试剂盒， 根据实验需要我们可以选择不同级别的产品： 1. 从纯度上看：常规操作（如酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化），普通纯度的质粒即可；对于转染实验，则需要无内毒素质粒提取试剂盒。 2. 从提取量上看：1-20μg，小量提取试剂盒；20-40μg，中量提取试剂盒；大于40μg，大量提取试剂盒。 3. 宿主菌类别上：主要分为普通细菌质粒提取试剂盒，真菌质粒提取试剂盒，酵母菌质粒提取试剂盒。 举例：SunShinecleanTM无内毒素质粒小量抽提试剂盒采用新型

【建议】本月讨论与整理专帖-T-A克隆，另开帖不加分！

法，在涂布有IPTG和X-Gal的筛选平板上，重组菌株为白色，未转入重组质粒的菌株为蓝色。 ◆ 可对小量提取的质粒DNA做限制性酶切，采用天为时代公司的质粒提取试剂盒，可快速提取多个样本，而且由于提取的质粒纯度高，不会有酶切切不开，影响实验的情况。 ◆ 也可直接用细菌菌落进行PCR反应，筛选存在目的片段的重组菌落。天为时代公司生产的一管便捷式PCR反应系统（MasterMix系列产品）特别适合这种方法。用灭菌的吸头挑取单个菌落到已加入MasterMix的PCR管中，加入特异引物，进行

重组质粒的转化、筛选和鉴定

液，DNA Ligation Kit Ver 2.1 (TaKaRa)，LB液体培养基(Luria-Bertani) ，LB固体培养基，50mg/ml卡那霉素(kanamycin)储存液，质粒快速提取试剂盒（博大泰克），10 X Buffer K， Pst I，EcoR I (TaKaRa) 2、器材 电基因转移议，恒温摇床，台式高速离心机，恒温水浴锅， 琼脂糖凝胶电泳装置，电热恒温培养箱，电泳仪，超净工作台， 微量移液枪，eppendorf管。 四、操作方法 1．构建重组质粒 质粒