Biospin 聚丙烯酰安凝胶DNA回收试剂盒

【共享】DNA凝胶回收方法及常见问题

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。胶回收的质量好否直接影响后继实验的成功与否。现今除了手工回收方法外，许多公司都开发了方便的回收试剂盒

DNA片段回收与纯化

。 二、DNA回收试剂盒（QIAquick Gel Extraction Kit Protocol） 1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的凝胶，置1.5ml离心管中，称重。 2. 加入Buffer QG（每100mg凝胶加Buffer QG 300μl），置50℃水浴10min。 3. 若回收片段小于500bp或大于4kb，则需加入异丙醇（每100mg凝胶加异丙醇100μl），混匀。 4. 将小柱放在2ml收集管上，将上述溶液加于柱上。 5. 4℃离心13000g×

PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接)

原理】 1.DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。 2.利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点，可用于PCR产物的克隆和测序。