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室温
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12个月
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100
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信帆生物
- 规格:
500ml
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文献和实验背景: 其实免疫组化在DAB染色后一般有四种情况:阳性染色效果很好、阴性染色、非特异性染色很深、阴阳脸(染色不均匀)。而阴性染色是许多初学者经常遇到的头疼问题。我身边有个研究生同学在我们实验室初次涉入免疫组化,听说步骤不难,跟我后面做了几次之后,就自己开始做了,连续做了三次,结果均是阴性染色。很扫兴,不知是什么原因导致的。 问题及其解答:免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些? 1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液,怎么这么高
也结合上去了),DAB孵育时间现在只用1、5 min也是背景深而特异性染色浅,那我又怀疑封闭血清了。 7、我做了两张切片:一张用老试剂盒内还剩下一点的血清而另一张用新试剂盒内的封闭血清,其余试剂(二抗、SP)均用新试剂盒提供的,结果是前一张效果很好,而后一张能够看到特异性染色,但背景太深,拍照效果不佳。--看来封闭血清也是罪会祸首之一。 结果分析显示:抗体稀释液的PH值偏低和封闭血清的失效导致了我的免疫组化结果的不佳,望大家在以后的组化实验中也要注意这两个不太引人注意的关键问题。--惨痛的教训
离子强度有利于免疫复合物的形成,而高离子强度则有利于分解。 DAB 显色 背景的深浅和特异性染色的深浅都可以由 DAB 孵育条件决定。DAB 显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现特异性染色较强而背景着色较浅时即可冲洗。DAB 显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明一抗浓度过高,需要下调抗体浓度;若很短时间就出现深背景,有可能非特异性蛋白封闭不全,需要延长封闭时间;DAB显色时间很长(如超过十分钟)才出现阳性染色,可能是一抗体浓度过低或者封闭时间过长。对于较弱
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