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大神教你瞬时转染快，准，狠！

siRNA 设计的靶点不好，一般情况下公司都是三保一，所以有一些确实存在敲不下来，或者过表达的质粒太长，例如基因长度大于 4000bp 的一般过表达效率不高。 2）这些质粒或者 siRNA 过期了。 3）转染的时间太短，或者 siRNA 或者质粒给的浓度太低，可以延长转染的时间，例如 4~6h 换液，改成 8h 换液。或者加大质粒或者 siRNA 浓度，例如之前给以 5ul，现在可以加 7.5 或者 10ul。   师兄，转进去细胞全死了？ 答：是不是细胞状态不好，还有可能

全新发布：外泌体样本收集指南

。 4、低温原则 所取样本离体后，应尽快置于干冰或 -80℃ 冰箱中，并保证在实验前始终处于 -70℃ 以下， 以避免外泌体降解。 二、样本制备指南 1、细胞上清 1) 细胞在正常含有血清的培养基中培养一定时间，贴壁细胞密度在 70%-80%，悬浮细胞密度在 60%-70%； 2) 对于贴壁细胞，去除原有培养基，加入适量的 PBS 缓冲液冲洗一次，彻底去除血清；对于悬浮细胞，300 g ，4℃，10 min 收集细胞，然后换为新的不含外泌体的培养基或者无血清替代培养基继续培养 24-48 h， 根据细胞

类器官培养与应用——肾类器官

1 培养基换液，细胞将重新聚合成EB。 6、培养 24h 后，将 EB 转移到 U 型底低吸附的 96 孔板中，加入 Step2 培养基，培养 36h。 7、将细胞用 Step3 培养基换液，培养 48h。 8、将细胞用 Step4 培养基换液，培养 42h。 中肾管（Wolffian duct, WD）前体细胞成熟 9、将上清吸出，加入 0.25% 胰酶/EDTA 至没过细胞，37℃ 消化 6min 解离细胞球。 10、血清封闭后，加入含有 CXCR4/KIT 抗体的稀释液（含 1×HBSS