1多重 qRT-PCR Master Mix

Real-Time qRT-PCR standard curves... efficiency is too h

in RT-PCR reactions include: Multiscribe Reverse Transcriptase (ABI), RNaseOUT RNase Inhibitor (Invitrogen), SYBR Green 2x PCR Mix (ABI). These, plus DEPC-treated water, are combined as a master mix. 5. Primer concentrations have been previously

【分享】多重PCR的一些体会

，就开始了多重PCR的引物设计。第一次设计的是个四重PCR，四队引物的设计花了我不少时间，为了保证四队引物的相互兼容性以及扩增效率的一致性，需要对四队引物以及引物对之间逐一配对分析，这里没有巧办法，所需只是耐心和时间而已。引物设计合成后，开始了配液，当时采用的PCR试剂都是各个单体，不像现在，大家都习惯用商业化的mix，包括 10x Buffer里都是不含MgCl2或MgSO4的，各个试剂之间安装均匀设计表，进行梯度设计。通过PCR后电泳，找出最佳的试剂梯度组合。第一次的实验还算比较顺利，可能是由于前期

荧光定量 FAQ 专题—前期准备

充分的准备是实验成功的关键，那么，qPCR 实验需要提前做好哪些了解呢？ 试剂的储存条件 市面上大多数 qPCR 试剂推荐 - 20 ℃ 避光长期储存。 Vazyme 的 ChamQTM 和 AceQ® 两个系列的 qPCR Master Mix，长期储存应置于 - 20 ℃ 避光，解冻后可于 4 ℃ 短暂存放；避免反复冻融。 原始模版稀释倍数 尽量选择 Ct 值落在 15 - 28 范围的稀释倍数作为原始模板稀释度。 反应体系与次数 推荐 20 μl 体系，Vazyme