Roche货号5893682001与5893801001现货

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重组蛋白表达

纯化目的蛋白通常对于确定该蛋白功能、结构或相互作用、产生特异性抗体或制备用于实际应用的酶是必不可少的。从其原始来源对天然表达的蛋白进行分离可能是一个涉及许多色谱步骤的复杂过程。在专用宿主生物体中对重组蛋白进行表达可以极大地简化该任务。此类表达系统通常可确保更高的表达水平。将靶蛋白与一种标签进行融合，便于使用亲和基质与之结合进行纯化。

使用固定化Ni²⁺对蛋白进行纯化

蛋白亲和纯化中最常用的技术是将6至14个组氨酸的序列设计到蛋白质的N-或C-末端（或甚至在暴露的环上）。这些延伸的多组氨酸可与二价金属离子如镍和钴发生强烈结合。这种结合效应可应用于蛋白的分离。金属离子可通过螯合剂固定于基质上，这使得这些离子仍然可以与蛋白质上的多组氨酸标签进行结合。当这些带有组氨酸标签的蛋白质通过含有固定化金属离子的色谱柱时，蛋白则会通过标签与色谱柱进行结合。然而，几乎所有未被标记的蛋白质则都会穿过色谱柱。通过用咪唑（能与多组氨酸标签竞争性的与柱结合）或通过降低pH（这降低了标签对树脂的亲和力）将蛋白从柱中洗脱出来。虽然这种方法通常用于纯化具有工程亲和标签的重组蛋白，但它也可用于对二价阳离子具有固有亲和力的天然蛋白质。

组氨酸标签

理想情况下，经组氨酸标记的靶蛋白对于Ni²⁺螯合基质的结合能力，相较于表达宿主中含有内源性组氨酸的蛋白来说结合能力更强。相对结合强度取决于有多少组氨酸可以同时结合至基质上（亲合力效应）。更长的组氨酸标签可赋予蛋白更强的结合能力，并可更好地分离目标蛋白与潜在的宿主杂蛋白。经典的组氨酸标签包含六个连续的组氨酸。具有10至14个组氨酸的标签可以获得更好的纯化效果。最重要的是，组氨酸标记的蛋白质可以在天然和变性条件下，使用Ni²⁺螯合基质进行纯化。由于这些基质具有亲水性和柔韧性，因而增加了靶蛋白的溶解度，并且几乎不会干扰蛋白质功能。这种独特的功能组合使组氨酸标签成为广泛的蛋白纯化应用的多功能工具。

cOmplete 组氨酸标签纯化树脂 是唯一可以面面俱到的进行大量蛋白质纯化的树脂。

• 使用最适合您蛋白质缓冲条件：保持蛋白质稳定，让蛋白（而不是你的纯化树脂）决定你是否需要使用DTT、EDTA或其他缓冲物质。
• 不断获得高纯度蛋白质：一步纯化，无需进行树脂再生。
• 保护蛋白质免受有毒镍的破坏：减少从树脂浸出的镍引起的蛋白质氧化和聚集。
• 在安全和环保的环境中工作：避免了对有毒镍进行处理，并可完全消除处理成本。

珠子尺寸：45至165 μM

结合能力：每毫升床体积的树脂可结合≥40mg蛋白质。树脂与各种类型蛋白质的结合能力可根据蛋白的特征（例如蛋白的大小）而变化。cOmplete组氨酸标签纯化柱与多组氨酸标记的蛋白质具有高度特异性结合。因此，与常规金属螯合物基质相比，其结合动力学可能看起来有所不同。通过在色谱纯化过程中降低流速，可延长蛋白质与树脂结合的时间，从而实现cOmplete组氨酸标签纯化柱的全部容量。

最大线性流量：1420cm/hour

推荐体积流量：体积流速是柱的横截面的函数。使用以下公式，可以将线性流速转换为体积流量（mL/min）：线性流速（cm /hour）×柱横截面积（cm²）/60。柱横截面积定义为Π×r²，Π是常数pi，r是柱的内半径。

上样/清洗时推荐使用的咪唑浓度：无组氨酸标签的蛋白质的非特异性结合是非常低的。在上样和/或清洗缓冲液中使用最高5mM的咪唑。如果用cOmplete 组氨酸标签纯化柱建立新的组氨酸标记蛋白得纯化方法，请不要使用咪唑。例如，如果在第一步后需要改善组氨酸标记蛋白的纯度，则在第二步中使用最终浓度最高为5mM的咪唑。

推荐的用于洗脱的咪唑浓度：最高500 mM。请注意：与其他可用的树脂相反，通常使用较低咪唑浓度（例如25至45mM），便可将结合的组氨酸标记的蛋白质从cOmplete组氨酸标签纯化柱上洗脱下来。

长期存储兼容性：20％乙醇，pH4.0至pH9.0

色谱兼容性：该树脂可与10mM EDTA、10mM DTT（在纯化过程中；孵育1小时）、6M盐酸胍、8M尿素、pH2.0至pH14.0相兼容。

清洗兼容性：4％SDS

cOmplete组氨酸标签纯化树脂是一种创新的高容量IMAC（固定化金属亲和色谱）基质，可通过分批或液相色谱程序，用于从总裂解物中纯化组氨酸标记的蛋白质。与目前所有主要基于NTA或IDA螯合剂化学的树脂相比，这种树脂是市场上唯一能够耐受含有EDTA的缓冲液的树脂。因为EDTA是一种已知的金属蛋白酶（几乎存在于任何细胞类型中）抑制剂，通过向缓冲液中添加EDTA，这种色谱材料可增加对目标蛋白质的保护。因此，这种树脂可以帮助蛋白质更好的抵抗降解，同时可使用成熟的亲和纯化方法对蛋白进行富集。
此外，无论您使用低分子量还是高分子量的蛋白，树脂都能保持其结合能力，并且其良好的特异性可实现一步纯化。通过使用最强的螯合剂之一，可确保流出的馏分中所含有的金属离子污染最少，从而保护您的下游应用。
完整的组氨酸标签纯化树脂也可以以预装的形式提供:1ml或5ml树脂形式。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

用于纯化多组氨酸标记蛋白质的EDTA兼容树脂。