BioRT Master 逆转录扩增（RT-PCR） 试剂盒

四 逆转录PCR (RT-PCR)

.nih.gov查它的序列，并用oligo等软件设计引物。 RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测或克隆多个基因的mRNA时比较有用。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行，然后取出1/10的反应产物进行PCR。而一步法RT-PCR具有其它优点（表4.2），cDNA合成和扩增反应在同一管中进行，不需要打开管盖和转移，有助于减少污染。还可以得到更高的灵敏

逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）

实验试剂   1．RNA提取试剂 2．第一链cDNA合成试剂盒 3．dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 4．Taq DNA聚合酶 实验步骤   1. 总RNA的提取：见相关内容。 2. cDNA第一链的合成：目前试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScriptTM

教您正确选择逆转录酶，适用 6 种不同应用

中，逆转录酶将 RNA 转化为 cDNA，然后通过 PCR 反应扩增 cDNA，为下游实验提供研究模板，因而逆转录酶是实验成功的关键步骤之一（如下图）。选定的逆转录酶应对所有样本均具有最高效率，即便是难转录 RNA 样本，如降解、抑制剂残留或具有高度二级结构的 RNA 样本。 图. 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）。RT =逆转录，RTase =逆转录酶 常用的 RT-PCR 方法分为一步法和两步法，每种方法都各有优缺点，简要概述如下： 表. 对比一步法和两步法 RT-PCR 定量 RT-PCR