猪蓝耳病毒美洲株/欧洲株核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）

PCR-SSCP法

PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时，突变检出率可达70％-95％，片段大于400bp时，检出率仅为50％左右，该法可能

pcr-sscp法

领域。例如，可以在PCR扩增中用同位素或荧光素等标记引物或核苷，也可以在电泳后用银染或溴化乙锭染色以显示结果。这里将重点介绍最常用的放射性同位素PCR-SSCP法。在进行PCR扩增特定靶基因序列时，利用γ-32P-ATP标记引物或直接在PCR反应体系中加入α-32P-dCTP进行PCR扩增，使扩增产物带有同位素标记物，然后将扩增产物变性为单链进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影显示结果。利用引物标记或碱基掺入法使PCR扩增产物带有同位素标记物，均可使产物信号增强几个数量级。二者相比较，前者经济

PCR产物的检测PCR-ELISA法

在一个引物的5’端标记上生物素以便使其能与包被板上的亲合素结合而固定PCR产物，而在另一引物的5’端标记FITC，用HRP标记的抗FITC抗体与之结合显色，即可进行常规ELISA检测。如设立标准对照，此技术还可用于定量分析。 试剂与配置 包被液：4.3mmol/L Na2HPO4 , 1.4mmol/L K2 HPO4, 0.05% (w/v) Tween20, 40mmol/L NaCl, 2.7mmol/LKCl (pH7.2) 链霉亲和素（13U/mg, Sigma