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二氢黄酮醇还原酶(DFR)试剂盒,微板法

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  • ¥1540
  • wksubio
  • WS8001W
  • 国内
  • 2025年08月05日
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    • 英文名

      Dihydroflavonol Reductase (DFR) Kit

    • CAS号

      WS8001W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    二氢黄酮醇还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)试剂盒说明书
    WS8001W 微板法 48 样)
    一、产品简介:
    二氢黄酮醇还原酶(DFREC 1.1.1.219)是花色苷合成代谢中的一个关键酶,负责将 3
    种二氢黄酮醇还原成无色花色素。在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽
    及其营养品质方面起着重要作用。
    二氢黄酮醇还原酶(DFR)作用于二氢槲皮素产生儿茶素,可与香草醛缩合形成红色化
    合物,在 500nm 处有特征吸收峰进而得出 DFR 的酶活性大小。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体60mL×1
    4℃保存
    试剂一
    液体15mL×1
    4℃保存
    试剂二
    粉体×1
    4℃保存
    临用前离心或甩几下使试剂落入底部,
    再加 1.5mL 乙醇充分溶解,4℃保存。
    试剂三
    粉体×1
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使粉剂落入底部,分
    别加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。用不完的
    试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,
    三天内用完。
    试剂四
    粉体×1
    4℃保存
    临用前离心或甩几下使试剂落入底部,
    再加 18mL 盐酸充分溶解,4℃保存。
    标准品
    粉体×1
    4℃保存
    若重新做标曲,则用到该试剂。
    三、所需的仪器和用品:
    酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、乙酸乙酯无水乙醇、研钵、冰。
    四、二氢黄酮醇还原酶(DFR)活性测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 15min,取上
    清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取
    2、上机检测:
    ① 酶标仪预热 30min 以上,温度设定 25℃,调节波长至 500nm
    ② 试剂放在 40℃水浴 5min
    ③ 按照下表在 EP 管中依次加入试剂:
    试剂名称(μL
    测定管
    对照管
    样本
    40
    40
    试剂一
    130
    150
    试剂二
    20
    试剂三
    10
    10
    混匀,40℃反应 30min
    乙酸乙酯
    200
    200本试剂盒仅供科研使用
    2
    37℃震荡 10min,取上层溶液,N2 吹干
    无水乙醇
    100
    100
    充分震荡混匀,待检液按照下表操作
    ④ 在 96 孔板中直接加入以下试剂:
    试剂名称(μL
    测定管
    对照管
    待检液
    50
    50
    试剂四
    150
    150
    混匀,25℃静置 3min,立即于 500nm 处读取吸光
    A10min 内读值完成)。A=A 测定管-A 对照
    管(每个样本做一个自身对照)。
    【注】:若ΔA 在零附近徘徊,可延长反应时间 T(如:50min 或更长),
    或加大样本量 V1(如增至 80μL,试剂一相应减少),重新
    调整后的反应时间 T V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、标准曲线方程为:y=0.0195x-0.0012x 是标准品浓度(μg/mL),y A
    2、按样本蛋白浓度计算:
    酶活定义:每毫克蛋白每小时分解二氢槲皮素产生1μg儿茶素所需酶量为一酶活单位(U)。
    DFR(μg/h/mg prot)[(ΔA+0.0012)÷0.0195×V 乙醇]÷(V1×Cpr) ÷T
    =256.5×(ΔA+0.0012)÷Cpr
    3、按样本鲜重计算:
    酶活定义:每克样本每小时分解二氢槲皮素产生 1μg 儿茶素所需酶量为一酶活单位(U)。
    DFR(μg/h/g 鲜重)[(ΔA+0.0012)÷0.0195×V 乙醇]÷(W×V1÷V) ÷T
    =256.5×(ΔA+0.0012)÷W
    V---加入提取液体积,1 mL
    V1---加入样本体积,0.04 mL
    T---反应时间,30 min=0.5h
    V 乙醇---0.1mL
    W---样本质量,g
    Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量测定试剂盒;
    附:标准曲线制作过程:
    1 标准品母液(1mg/mL):临用前加 1mL 无水乙醇溶解(1mg/mL)。
    2 用无水乙醇把标准品稀释成以下浓度:01020304050. μg/mL。也可根据
    实际来调整标准品浓度。
    3 按照第④步骤测定管的加样表操作,依据结果即可制作标准曲线。

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