Tris-HCl/SDS浓缩胶缓冲液(1mol/L),pH6

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）（图）

一. 实验原理SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。二. 试剂和器材试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）：0.6ml 1mol/L的Tris-HCl（pH6

种子蛋白质系统分析：（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法）

HCI调pH 值至8.7，定容至100ml 。( 6)浓缩胶缓冲液（0.5mol/L Tris-Hcl，pH6.8）Tris 6.06g ，适量水溶解，然后用1mol/L HCI 调pH值至6.8，定容至l00ml。( 7 ) 10%SDS SDS1g，加水10ml溶解。( 8 ) 10%过硫酸铵 1g过硫酸铵，加水10ml溶解，现用现配，冰箱中最多可贮存一周。( 9 ) TEMED（四甲基乙二胺）4℃，棕色瓶中贮存。( 10)样品缓冲液（pH8.0）Tris 6.05g，甘油50ml，巯基乙醇25

SDS-PAGE蛋白质电泳常见问题分析

迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 Q：配胶缓冲液系统对电泳的影响? A：在SDS-PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低;而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩