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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
27
- 保质期:
保存期限为12个月
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50T
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| 鲨鱼源性成分(Shark)核酸检测试剂盒 | 50T | LZ-P2152 |
本试剂盒即开即用,用户只需要提供样品DNA模板,引物和探针经过优化,灵敏性高,提供阳性对照,便于区分假阴性样品,特异性高,引物是根据指标DNA高度保守区设计,不会跟其他微生物的DNA发生交叉反应,既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级,本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
【试剂组成】
【使用方法】
试剂准备(试剂准备区)
稀释标准曲线样品(以10E1-10E6拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同。
3. 在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在4号管中加入5 μL 1×10E5拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E4拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
样本处理(样本处理区)
2.1如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样本体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
2.2 核酸提取:核酸提取可以采用上海抚生实业有限公司的核酸提取或纯化试剂,操作方法按照说明书进行。
3.Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
3.1如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。
| T-112A胰凝乳蛋白酶(含10mL酶解缓冲液)1mL | IL-5(Human Interleukin 5) ELISA KIT 人白介素-5 96T |
| 人胚胎肌肉组织来源细胞;CCC-HSM-2 | Rhesus antibody Rh SERPINI2/PI14 蛋白酶抑制剂14抗体 规格 0.2ml |
| CREB3L1 Others Human 人 CREB3L1 / OASIS (aa 396-519) 人细胞裂解液 (阳性对照) | Rhesus antibody Rh MLL5 髓系/淋巴混合谱系白血病蛋白5抗体 规格 0.2ml |
| FCGR2A Others Human 人 CD32a / FCGR2A 人细胞裂解液 (阳性对照) | Anti-phospho-Synapsin I (Ser553) /FITC 荧光素标记0酸化神经突触素1抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml |
| MRC-5 人胚肺细胞 | RF(Human rheumatoid factor) ELISA Kit 人类风湿因子Multi-class antibodies规格: 48T |
| EB病毒转化的人B淋巴细胞;KM0501 | KT3 tag: KT3 tag抗体 0.1ml |
| Goat Anti-human IgG 羊抗人IgG 1mg | Anti-Cathepsin K 组织蛋白酶K抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml |
| ARF6: ADP核糖基化因子6抗体 0.2ml | SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-7 淋巴瘤细胞,Jecket细胞 A172(胶质母细胞瘤细胞) |
| Rhesus antibody Rh CD150/SLAMF1 信号淋巴细胞活化分子CD150抗体 规格 0.2ml | 人脐动脉平滑肌细胞cDNAHUASMC cDNA |
| TIMP-1(Human tissue inhibitors of metalloproteinase 1) ELISA Kit 人基质金属蛋白酶抑制因子1 96T | Hepa 1-6(小鼠肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2 |
| Anti-IL-6(Human)/HRP 辣根过氧化物酶标记白介素6(人)抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml | L1细胞,卵巢癌细胞 急性T细胞白血病细胞),Jurkat细胞 人皮肤黑色素瘤细胞;SK-MEL-1 |
| Pan Cytokeratin: 广谱细胞角蛋白PCK抗体 0.1ml | 淋巴成纤维细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml) |
| Anti-CK7/FITC 荧光素标记细胞角蛋白7抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml | 鲨鱼源性成分(Shark)核酸检测试剂盒NCI-H520细胞,人肺鳞癌细胞 小鼠间质细胞瘤细胞,MLTC-1细胞 CM-R023大鼠淋巴管内皮细胞完全培养基100mL |
| NAP1 (nucleosome assembly protein 1) 核小体组装蛋白1(多肽)Multi-class antibodies规格: 0.5mg | COS-7L, 非洲绿猴成纤维细胞 |
| D型-过氧化酶活化增生受体抗体 Anti-PPAR-delta 0.2ml | IFNAR1 Others Mouse 小鼠 IFNAR1 / IFNAR 人细胞裂解液 (阳性对照) |
1.PCR 操作各阶段应严格分区操作,避免交叉污染。
2.试剂盒各组分使用前应充分融化混匀,离心数秒后使用。
3.各组分不得与其他产品或不同批号的相应成分进行互换。
4.待测标本若不及时检测,应保存于-20℃或-70℃。
5.样品的处理应该严格按照生物安全规范操作。
6.PCR 操作人员应具有经验和受过专业培训。
7.本试剂盒仅用于科研使用,不做为临床诊断使用。
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文献和实验样本想要成功转化成为 PCR 的结果,前期需要注意的步骤有很多,包括:样本的采集、运送、保存以及核酸提取,每一个步骤都需要小心翼翼,中间的过程可谓是困难重重。样本在转化成 PCR 结果的过程中,究竟是哪些因素导致转化过程如此艰难呢?下面由小编带着大家一起去扒一扒样本中影响 PCR 检测的抑制物。 图 1. 核酸处理与检测流程图 一、PCR 抑制物的来源 PCR 抑制物的来源包括内源性与外源性两种 1. 内源性 天然存在标本中的组成成分。如:免疫球蛋白、蛋白酶、血红蛋白及其代谢
、关键试剂操作条件 1. DAB 显色反应大约需要30s-5 min,要控制好反应时间,勿使背景颜色过深。具体的可能还是得根据切片组织来源和切片厚度、试剂盒说明摸索条件。 2. 蛋白酶K工作液处理时间、温度须在范围内摸索,温度过高,时间过长,易造成脱片且可能破坏核酸结构,出现假阳性。 3. 阳性样本的DNase 1处理一般建议室温,10 min 即可。 五、如何减弱非特异性染色 肝脏或肾脏,因富含内源性过氧化物酶,需要增加过氧化氢浓度和延长孵育时间。其他还可以加强灭活、缩短 DAB 孵育
溶酶体途径 -- 外源性抗原的降解 外源性抗原主要来自通过各种途径进入机体的非己成分,例如细菌产生的毒素。病原体所展示的PAMP由固有内体―溶酶体途径(endosome/ly~somepathway)加工提呈外源性蛋白质抗原大致分为四个阶段。 蛋白质抗原加工提呈的两条主要途径 1.MP:低分子质量多肽;Cx:钙联蛋白;TAP:抗原加工相关转运蛋白;Ii:Ia相关不变链Ⅱ类结合的不变链肽段。 外源性抗原
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