本试剂盒仅供科研使用
尿素（Urea）含量（酶法）检测试剂盒说明书
（货号：WS1021F 分光法 48 样）
一、产品简介：
尿素（Urea）又称碳酰胺，旧称尿素氮（BUN），是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白
质代谢分解的主要含氮产物，也是目前含氮量最高的氮肥。
该试剂盒利用尿素在脲酶的作用下水解产生氨离子和二氧化碳，氨离子在碱性介质
中与酚显色剂生成蓝色物质，该物质的生成量与尿素含量成正比。通过于625nm处检
测该有色物质含量进而得出尿素氮含量。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉体 mg×1 支
-20℃保存 临用前甩几下使粉体落入底部，再
加
1.7mL 的蒸馏水溶解备用。
试剂二
液体 4mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
试剂三 A×2 支
试剂三 B×1 支
4℃保存
临用前向一支试剂三 A 中加入 77μL 的
试剂三 B，混匀备用。
标准管
粉体 mg×2 支
4℃保存
每支临用前加1mL蒸馏水溶解，即浓度
为6mg/mL的尿素，检测前再用蒸馏水
稀释200倍（5:995）即成0.03mg/mL
（0.5mmol/L）的尿素。
三、所需仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、天平、移液器、离心机、蒸馏水。
四、尿素（Urea）含量检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实
验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 液体样品：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL 生
理盐水，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30
次）；12000rpm 室温离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min，设置温度在 37℃，设定波长到 625nm。
② 做实验前选取 2 个样本，找出适合本次检测样本的稀释倍数 D（如：尿液样本可用
蒸馏水稀释 100 倍）。
③ 所有试剂解冻至室温，在 EP 管中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
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试剂名称
（μL）
测定管
空白管
（仅做一次）
标准管
（仅做一次）
样本
60
蒸馏水
60
标准品
60
试剂一
30
30
30
蒸馏水
550
550
550
混匀，37℃避光反应 15min
试剂二
80
80
80
试剂三
80
80
80
混匀，37℃避光反应 20min，全部澄清液体转移至 1mL 玻
璃比色皿（光径 1cm）中，于 625nm 处读取吸光值 A，△A=A
测定-A 空白。
【注】：1.测定管 A 值若超过 1.5，可把样本用生理盐水或蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计
算公式。
2.若△A 差值在零附近徘徊，可增加样本加样量 V1（如增至 120μL，则蒸馏水相应减少，
保持总体积不变；空白管和标准管维持不变），则改变后 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、按液体体积计算：
尿素含量(mg/L)=(C 标准×V1)×103×△A÷(A 标准-A 空白)÷V1×D
=30×△A÷(A 标准-A 空白)×D
尿素含量(mmol/L)=(C 标准×V1)÷60.04×103×△A÷(A 标准-A 空白)÷V1×D
=0.5×△A÷(A 标准-A 空白)×D
2、按细胞数量计算：
尿素含量(ng/104 cell)=(C 标准×V 标)×106×△A÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D
=60×△A÷(A 标准-A 空白)×D
尿素含量(nmol/104 cell)=(C 标准×V 标)÷60.04×106×△A÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V)×D
=△A÷(A 标准-A 空白)×D
C 标准---尿素标品浓度，0.03mg/mL；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
V1---加入样本体积，0.06mL；
V 标---加入标准品体积，0.06mL；
V---提取液体积，1mL；
60.04---尿素分子量；
500---细胞数量，万。
文献和实验
