核酸提取或纯化试剂（商品名：MagaBio plus 病毒R

RNAi实验原理与方法选择

一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因，病毒感染等各种方式引入的双链RNA，切割将RNA降解为19-21

增进RNAi分析的强大工具

Complete RNAi Kit和购买到的利用RNase III 酶的试剂盒产生d-siRNA。BLOCK-iT™ Dicer Complete RNAi Kit产生的大小为21-23nt的核苷酸（泳道2），RNase III 酶的产物12-15个核苷酸（泳道3）。通过与100bp的ladder比较显示（泳道1）。（4％E-Gel） 图4 使用BLOCK-iT™ Dicer 酶比使用一种细菌RNase III 酶产生的siRNA 提供更好的结果 GripTite™ 293 MSR 细胞转染lacZ

RNAi技术专题之：体外转录合成双链RNA

突变和化学修饰的耐受性，认为siRNA的5’端相对于3’端具有对突变的较高耐受性。有学者认为正义链3’突出端的任何碱基修饰对siRNA作用效果均无明显影响。还有学者认为与反义链互补的正义链3’端发生1—4个碱基的错配反而有助于增强RNAI的活性。二、siRNA制备方法目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括化学合成体外转录长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAsPCR制备