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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系：
PA317逆转录病毒包装的NIH3T3细胞
- ATCC Number：
/
- 细胞类型：
科研细胞
- 肿瘤类型：
/
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 库存：
10
- 英文名：
PA317
- 生长状态：
/
- 年限：
尽快解冻复苏细胞进行培养
- 运输方式：
快递形式
- 器官来源：
/
- 是否是肿瘤细胞：
/
- 细胞形态：
正常
- 免疫类型：
PA317逆转录病毒包装的NIH3T3细胞
- 物种来源：
PA317逆转录病毒包装的NIH3T3细胞PA317逆转录病毒包装的NIH3T3细胞
- 相关疾病：
PA317逆转录病毒包装的NIH3T3细胞
- 组织来源：
PA317逆转录病毒包装的NIH3T3细胞
- 规格：
1x10^6
细胞特性：
1） 来源：见说明
2） 形态：请直接向我司客服索取
3） 含量：>1x10^6 细胞数
4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5） 用途：仅供科研使用。
6） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置2-3小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的90%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的90%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1500rpm离心5min；
3）用适量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=5:4:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1500rpm离心5min；
3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
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文献和实验逆转录病毒载体属RNA病毒，但可在受染细胞内反转录产生DNA互补链，此DNA单链可作为模板合成第二条DNA链，第二条DNA链可掺入细胞基因组DNA中。此病毒可利用宿主细胞的酶自行转录与复制，RNA可合成蛋白，再包装病毒，RNA从胞内释放，成为感染性病毒，该载体可经不同方式改变。介导过程可使病毒单拷贝基因组稳定地进入细胞。首先，逆转录病毒的繁殖必须要有适当的包装细胞系，以利于产生高滴度的病毒，同时还具有适当的结构。如：ψ2(第一代包装细胞)，PA317(第二代包装细胞)，ψ1-CRIP
7.淋巴瘤2株：LY-S, T2 8.乳腺癌1株：SK-Br-3 9.脑胶质母细胞瘤1株：BT325 10.胎盘绒毛膜上皮样癌1株：JAR 11.黑色素瘤1株：A375 12.人纤维肉瘤1株：HP 13.骨髓瘤细胞1株：SP2/0 14.病毒包装细胞2株：PA317, NIH3T3 15.其他：L929
tydyhan：我一直做细菌这块，对病毒操作不是很懂，请教大家：建立表达某基因的重组逆转录病毒载体的B16细胞系含某基因的重组逆转录病毒载体已获得，需转染PA 317包装细胞，通过G418筛选获得表达某基因的重组逆转录病毒。Polybrene进行转染B16细胞，筛选阳性转化克隆，获得稳定表达的B16细胞株。这里怎么具体进行操作??丁香园网友adychen认为：１、首先最好选择的是带ＥＧＦＰ逆转录病毒载体，方便以后的转染率和感染率的观察．２、重组载体；３、得出载体抗性基因的抗生素最佳细胞筛浓度
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