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文献和实验100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中(注意组织粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%),充分混合均匀。 ② 室温放置5min,然后加入200??l的氯仿,盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。 ③ 12000rpm离心10min,取上层水相于一新的EP管中(千万不要将中间的沉淀层和下层液混入,否则重新离心分离),加入500??l异丙醇,温和颠倒混匀。室温放置10min,12000rpm离心10min。 ④ 小心地弃去上清液,加入1ml的75%乙醇,涡旋混匀,4℃下12000
,以混合内容物。应确保离心管的整个内表面 均与溶液Ⅱ接触。不要振荡,将离心管放置于冰上。 3)加150μl用冰预冷的溶液Ⅲ 溶液Ⅲ 5mol/L乙酸钾 60ml 冰乙酸 11.5ml 水 28.5ml 所配成的溶液对钾是3mol/L,对乙酸根是5mol/L。 盖紧管口,将管倒置后和地振荡10秒钟溶液Ⅲ在粘稠的细菌裂解物中分散均匀,之后 将管置于冰上3-5分钟。 4)用微量离心机于4℃12 000g离心5分种,将上清转移到另一离心管中。 5)可做可不做:加等量酚:氯念,振荡混匀,用微量离心机于4 ℃
4溶于100 ml水。(2)1 mol/L NaH2PO4 溶液:15.601 g NaH2PO4 溶于100 ml水。(3)0.1 M 磷酸缓冲液(pH7.0):1 mol/L Na2HPO4取5.77 ml,1 mol/L NaH2PO4取4.23 ml,定容至100 ml。(4)10%SDS溶液:将90 ml 水稍微加热,加10 g SDS,搅拌溶解,加入几滴浓盐酸调节pH至7.2,然后加水定容至100 ml。(5)0.5 M EDTA (pH8.0):在80 ml 水中加入18.61 g
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