WB（Western blotting）

WB （western blot）-经验汇总

做了很久的 WB（western blot），走了很多弯路，其实发现 WB 想要做好并不难，总结了 WB 实验中可能会遇到的问题，分析了可能的原因及对应的解决方案，希望能成为你实验成功的基石。 问题 1：转膜不充分 (1) 膜没有完全均匀湿透 使用 100% methanol 浸透膜。 (2) 靶蛋白分子量小于 10 000 选择小孔径的膜，缩短转移

SDS-PAGE Western Blotting Protocols

  Adapted from existing protocols by Vinh Pham Last modified: June 5, 2003. MATERIALS All materials required are mentioned within the respective sections below. PROCEDURE Part I – Sample Preparation 1. Collect

WB 为何又翻车？

最近师妹开始做 WB 实验了，但是一天又一天重复做，却次次结果不理想。除了没有拿到组会可以汇报的条带外，师妹集齐了所有奇奇怪怪的条带：微笑带，皱眉带，拖尾带，甚至没有条带…… 师妹也因此对我发出了灵魂拷问：「为什么 WB 实验这么容易翻车？」 虽然 WB 是一类基础实验，但是基础并不代表简单。翻车的主要原因在于 WB 的步骤实在繁琐：从配置蛋白胶开始，到蛋白电泳、蛋白转膜、抗体孵育，一整套流程下来花费 1～2 天的时间才能进行最后的显影。这些环节中但凡有一个出错，就会导致实验