长枝木霉DNA标准品

qPCR常见问题及其分析

比。　　绝对定量实验必须使用已知拷贝数的绝对标准品，必须做标准曲线。相对定量可以做标准曲线，也可以不做标准曲线。　　相对定量实验有两种方法：标准曲线法和CT值比较法。如果使用标准曲线法，可以使用绝对标准品，也可以使用相对标准品，而且相对标准品在实验操作上更为简便易行。相对标准品是只知道样品中DNA或RNA的稀释比例而不需要知道其分子数目的标准品，典型的做法是将一个已知pg数的样品做一系列梯度稀释。　　 CT值比较法是利用CT值与起始DNA浓度的对数成反比的数学关系，来计算不同样本之间的相对百分

定量PCR常见问题及策略你知道多少？

越低，重复性越差，应减少样品的稀释倍数。   Q9．变性温度是否合适 大部分的双链DNA在95°C就开始解链了，在有些情况下在90至94°C都不能很好地变性DNA。由于部分变性，参加反应的探针和引物相应的减少了，因此反应效率会下降。   Q10．变性时间是否合适 15到20秒对于变性扩增子是足够了，然而，长一点的产物，可能会需要30秒，60秒的变性时间通常是不需要的。   Q11．退火温度和时间是否合适 检查引物和探针的Tm值

Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手

稀释 Slope ～ -3.3 R2 > 0.99 精密度 至少 3 个重复 标准差 除了这些因素，还必须评估和验证合适的实验对照（如无模板对照，无 反转录酶对照等）以及模板质量。 3. Real-time qPCR 定量方法 可以分绝对定量和相对定量。绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较，从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒 DNA，体外转录的 RNA，或者是体外合成的 ssDNA。相对定量可以分比较 Ct 法