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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Phytic acid content test kit
- CAS号:
WS1290W
- 保质期:
3个月
- 供应商:
上海瓦兰生物
- 保存条件:
4℃
- 规格:
96T
本试剂盒仅供科研使用
植酸含量测定试剂盒说明书
(货号:WS1290W 微板法 96 样)
一、产品简介:
植酸(Phytic acid,又称为肌醇六磷酸)在多种植物组织(特别是米糠与种子)中作
为磷的主要储存形式,其结构是肌醇的 6 个羟基均被磷酸酯化生成的肌醇衍生物,对种
子的正常生长起着重要作用。植酸具有较强的螯合作用,近几年的研究发现植酸作为抗
氧化剂在保鲜、抗氧化等方面有一定作用。
植酸可使氯化*-磺基水杨酸紫红色显色剂褪色,且植酸含量与褪色程度成正比, 通
过检测 500 nm 处吸光值的下降量进而得出样品中植酸含量。
二、试剂盒的组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 110mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉体×2 支
4℃保存
试剂二
粉体×2 瓶
4℃保存
标准品
粉体×1 支
4℃保存
若要做标曲则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、离心机、研钵、蒸馏水。
四、植酸含量测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:
称取烘干粉碎过 50 目筛的干样 0.1g 或鲜样 0.1g,加入 1mL 提取液,300rpm 室温震
荡提取 30min 后 3800rpm,4℃或室温离心 10min,取上清液待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
g):提取液(mL)为 1:5~10 的比例进行提取。
② 液体样本:澄清的液体样本直接测定,若浑浊则离心后取上清检测。
2、上机检测:
① 酶标仪预热 30min,调节波长到 500 nm。
② 显色剂(紫红色)配制:临用前向一支试剂一中加入 1mL 蒸馏水混匀后全部转移至一瓶试剂二
中,再向试剂一中加入 1mL 蒸馏水涮洗管壁后全部转移至相应试剂二
瓶中,接着向该试剂二瓶中加入 3.5mL 的蒸馏水混匀,即得到总体积
为 5.5mL 的显色剂(紫红色)。用不完的试剂 4℃保存并在三天内用完。
③ 上清液稀释:可先取 2 个样本预测,确定适合本批样本的稀释浓度 D:植酸含量高的
样本,可用提取液做梯度稀释确定最佳稀释倍数,如稀释 2 倍、5 倍、10 倍。
④在 96 孔板中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
空白管
(仅做一次)
样本
50
蒸馏水
50
显色剂
100
100
蒸馏水
50
50
混匀,2min 后于 500nm 处读取 A 值,△A=A 空白-A 测定。本试剂盒仅供科研使用
2
【注】1.若 A 测定管的值小于 0.2 则需要将样本用提取液稀释后从新检测,如稀释 5 倍,稀释倍数 D
带入计算公式重新计算。
2.若△A 的值小于 0.05,则需要增加样本上样量 V1,如增至 100uL,同时蒸馏水相对减少以保
持原体系不变,则改变后的 V1 重新带入计算公式计算。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y=25.5x-0.0011,x 是标准品质量(mg), y 是△A。
2、按样本鲜重计算:
植酸(mg/g)=[(△A+0.0011)÷25.5] ÷(W×V1÷V)×D=0.784×(△A+0.0011)÷W×D
3、按液体体积计算:
植酸(mg/mL)=[(△A+0.0011) ÷25.5] ÷V1×D=0.784×(△A+0.0011)×D
V---加入提取液体积,1mL;
V1---加入样本体积,0.05mL ;
W---样本质量,g;
D---稀释倍数,若未稀释则值为 1。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(10mg/mL):标准品用 1mL 蒸馏水溶解。(母液需在两天内用)。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样体系操作,根据结果即可制作标准曲线。
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