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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 库存:
100
- 样本:
血清、血浆及相关液体样本
- 标记物:
HRP标记
- 适应物种:
农残
- 应用:
仅供科研
- 检测方法:
双抗夹心
- 检测范围:
详见说明书
- 规格:
96T
赭曲霉毒素(OT)ELISA试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
6.有效期:6个月
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文献和实验酶联免疫吸附(ELISA)可以:(1)免疫酶染色各种细胞内成份的定位;(2)研究抗酶抗体的合成;(3)显现微量的免疫沉淀反应;(4)定量检测体液中抗原或抗体成份。实验原理双抗体夹心法(常用于测定抗原)用特异性抗体包被于固相载体,经洗涤后加入含有抗原之待测样品,如待检样品中有相应抗原存在,即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合,经保温孵育洗涤后,即可加入酶标记特异性抗体,再经孵育洗涤后,加底物显色进行测定,底物降解的量即为欲测抗原的量。实验步骤一、材料准备1. 实验材料:血清、血浆、体液
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2+G1+G2)。因此,研究一种新的高灵敏度、高选择性的同时测定黄曲霉毒素的检测方法,对于食品的安全性检测和食品的质量控制具有十分重要的意义。 现在应用比较广泛的黄曲霉毒素的检测方法主要有:薄层色谱法(TLC)[4]、高效液相色谱法(HPLC)[5]、二维薄层色谱法[6]、酶联免疫吸附测定法(ELISA)[7]等。薄层色谱法操作繁琐、污染大、定量差、耗时长;而酶联免疫法虽操作简单、灵敏度高,但特异性差。普通的HPLC结合荧光检测的方法,黄曲霉毒素需要经过衍生化以后才能进行测定,操作烦琐,分析
酸克伦特罗的浓度成反比。 2.2 ELISA用于饲料中毒素的测定 饲料中的毒素主要是由真菌产生的,主要包括黄曲霉毒素,简曲霉毒素等。运用ELISA能测定饲料中霉菌毒素的含量。以测定黄曲霉毒素为例,黄曲霉毒素是一组化学结构类似的化合物,目前已分离鉴定出12种。在我国饲料标准中黄曲霉毒素的含量通常以黄曲酶毒素B1 计,本文仅介绍竞争性ELISA间接法检测黄曲霉毒素B1 。目前ELISA试剂盒也广泛用于饲料中黄曲霉毒素B1 的测定。B1 抗原能与黄曲霉毒素B1 与载体蛋白的复合物竞争抗黄曲霉毒素











