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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 英文名:
pCMV-SPORT6-TRIM13(cattle)(2点插入)
- 库存:
999
- 供应商:
圻明生物
- 规格:
管
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl无菌水溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒。
pCMV-SPORT6-TRIM13(cattle)(2点插入)圻明公司现货供应,可按客户需求单独构建载体,
一、载体构建:
(1)目的DNA片段和载体的制备;
(2)目的DNA片段和载体的连接;
(3)连接产物的转化;
(4)克隆筛选。
(5)测序验证及目标质粒交付
二、详细内容
1、以PCR扩增为基础的各类载体构建,如大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体;报告基因载体等;
2、基因定点突变,包括单点突变,多点突变,基因缺失等;
3、载体元件替换和改造;
4、siRNA载体和miRNA表达载体构建;
5、过表达载体构建。
详询客服。公司整合了国外数个基因库资源,具有以下优势:
种属齐全:人、小鼠、大鼠、其它种属;
数量众多:多达几万数量cDNA克隆(cDNA模板质粒)和ORF克隆(ORF表达质粒);
质量优异:保证目的基因序列正确,无氨基酸突变,每个克隆质粒均可提供相应的测序报告;
价格实惠:与您亲自调取基因相比,我们的服务让您更加省时、省力、省心;
pCR-XL-TOPO-ZNF236(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-HTR3D(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
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pCR-XL-TOPO-BZRAP1(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-FAM38A(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-POC5(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-ZNF404(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-TRIM60(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-NT5C1A(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-RGL4(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-ANKRD23(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-BluntII-TOPO-PLEKHN1(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
pCR-XL-TOPO-SLIT1(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
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pCR-BluntII-TOPO-ANKDD1A(human) 大肠杆菌 基因模板 cDNA 人 Kan
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文献和实验的克隆方法将目的基因克隆进入门载体。 (2)混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体以及Gateway LR Clonase酶,构建表达克隆。(表达克隆用来在合适的宿主中进行蛋白的表达和分析。) 有几种方法可以构建Gateway入门克隆。无论您选择何种方法,创建的入门克隆都是准备用来与各种目的载体进行重组。 (1)PCR克隆(定向TOPO克隆至入门载体或与供载体B×P重组) (2)限制性内切酶消化和连接进入入门载体 (3)使用pCMV•SPORT6或pEXP-AD502*构建
6-3、HGHrevpCMV-HAPCMV-F,CMV-Profor,TREforPCMV-R,EBVrevpCMV-MYC(AMP+)PCMV-FPCMV-R, EBVrevpCMVmyc/nucCMV-ProforBGH rev,c-mycrevpcmv-scriptEXVectorT3T7pCMV-Sport6T7/M13forSP6/M13revpCOLADuet-1(MCSI)ACYCDuetUP1 PrimerDuetDOWN1pCOLADuet-1(MCSII)DuetUP2T7TERpCR2.1T
,所有的5个Gateway?入门载体提供了Kozak 序列。此外,pENTR?11提供了SD (Shine-Dalgarno)序列,便于在大肠杆菌中有效的翻译。C Gateway?改造过的cDNA文库如果您已经有了用Gateway兼容载体构建的cDNA文库,您就可以通过pDONRTM载体和BP ClonaseTM酶混合物进行一个简单的重组反应,很容易地把单个克隆转换成Gateway?入门克隆。这样就不再需要亚克隆和测序,为您节约数小时的时间。SuperScript cDNA文库使用pCMV·SPORT构建,有几种
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