HFF-1人皮肤成纤维细胞

人皮肤成纤维细胞（HFF-1）

产品编号：CL-465h

 

细胞特性

1. 细胞纯度高于90%；

2. 细胞生长特性：贴壁生长；

3. 细胞形态：成纤维细胞样，长梭形，边缘不规则，单层贴壁生长，背景干净；

4. 分离基物：取白人新生男孩的包皮制备获得；

5. 不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

培养基及培养冻存条件准备

培养基	84%DMEM-H+15%FBS+1%丙，酮酸钠
培养条件	37℃；5%CO2+95%空气；培养箱湿度为70%-80%；
冻存液	50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO

运输和保存

1. 1mL冻存管装细胞：干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2. T25瓶复苏的存活细胞：常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理：

1. 收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱中放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们；

2. 请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×、20×各2-3张）以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据；

3. 贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中），加入新配制的完全培养基5-6mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4. 备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

 

一、细胞复苏：

1. 冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中，迅速没入37℃水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以1min内全部溶解为宜；

2. 在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内，1000-1200rpm离心5min，弃去上清液，用1-2mL完全培养基重悬细胞；

3. 将细胞悬液加入到含有5-6mL完全培养基的T25瓶中，放入培养箱培养。

二、细胞传代：

1. 将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入1-2mL胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；

2. 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，肉眼可见细胞层脱落，即消化完成，否则继续消化），直接吸掉胰酶，加入5-6mL完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散；

3. 将细胞悬液按1:2比例分到新的T25瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；

4. 注意培养基pH值变化和细胞密度，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%-90%时，重复传代操作或者冻存。

三、细胞冻存:

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

 

注意事项：

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。