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Farage 人 B 淋巴瘤
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武汉赛奥斯生物科技有限公司
FARAGE,Farage OL,Farage Original Line
见详情介绍
999
人
常温/干冰
1×10⁶cells
Farage 人 B 淋巴瘤细胞
产品编号:CL-594h
细胞特性
含量:>1x106cells
形态:淋巴母细胞样,悬浮生长,培养皿培养会贴壁
生长特性:悬浮生长
规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
用途:仅供科研使用
细胞运输、保存及注意事项
复苏细胞
冻存细胞
包装
充液的T25细胞培养瓶
1mL冻存管
运输条件
常温
干冰
保存方式
75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒温细胞培养箱
-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏
注意事项
① 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们;
② 请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照,10X和20X各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据;
③ 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基);
④ 运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
培养基及培养冻存条件准备:
完全培养基
RPMI-1640完全培养基:90%RPMI-1640+10%FBS
培养条件
气相:空气,95%;二氧化碳,5%;温度:37℃;培养箱湿度为70%-80%
冻存液
50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO
细胞复苏、传代、冻存操作
一、细胞复苏:
① 冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出放入PE手套中,迅速没入37℃水浴锅,摇晃冻存管加速溶解,以1min内全部溶解为宜;
②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9mL完全培养基的离心管内,1000-1200rpm离心5min,弃去上清液,用1-2mL完全培养基重悬细胞;
③将细胞悬液加入到含有6-8mL完全培养基的T25瓶中,放入培养箱中竖立培养。
二、细胞传代:
①离心法:收集细胞,1000rpm 条件下离心 5 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2的比例分到新的含 8ml 培养基的 T25 瓶中。
②半量换液法:培养瓶静置 5-10 分钟后,将上清培养基轻轻吸走一半,剩余留有细胞沉淀的培养基重悬混匀,细胞悬液按 1:2 的比例分到新的含 8ml 培养基的 T25 瓶中。
③注意培养基pH值变化和细胞密度,定期换液(每周 2-3 次),待细胞密度达到大于 于 2×10 6 个/ml 时,重复传代操作或者冻存。
三、细胞冻存:
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
① 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
② 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
③将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
①所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
②建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
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