RS4;11人急性淋巴白血病细胞
产品编号:CL-665h
细胞介绍
RS4;11 是从一名患有急性淋巴细胞白血病的 32 岁白人女性患者的骨髓中分离出来的淋巴母细胞系。 这些细胞缺乏表面和细胞质免疫球蛋白,并且 CALLA (CD10) 呈阴性。这些细胞的髓过氧化物酶和氯乙酸酯酶也呈阴性,并且不被苏丹黑染色。这些细胞对末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 呈强阳性,对 BA-1 (CD24)、BA-2 (CD9) 和 MHC II 类抗原 (HLA DR) 呈阳性。
细胞特性
来源:骨; 骨髓; 急性淋巴细胞
形态:淋巴母细胞,悬浮生长
含量:>1x10⁶cells
规格:T25x1瓶(常温运输)/ 2mL冻存管x2支(干冰运输)
用途:仅供科研使用
培养基及培养冻存条件准备
完全培养基 |
RPMI-1640培养基,89% 优质胎牛血清,10% 双抗,1% |
培养条件 |
气相:95%空气,5%二氧化碳;温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 |
冻存液 |
90%血清 + 10%DMSO,现用现配 |
细胞接收注意事项
收货当天发现异常,请在24小时内及时联系客服,逾期视为收货良好!
冻存管形式:收货后及时置于-80℃冰箱保存,若长时间不使用,应过夜转移至液氮。复苏时每管一次用完不得留存;
T25形式:①收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37℃培养箱放置2-3h(视细胞密度而定)稳定细胞状态,镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100x,200x各一张,观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况),以此做为收货依据;②抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。③运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
细胞复苏、传代、冻存操作
(一)冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
(二)细胞传代
待细胞密度达到80%~90%时,即可进行传代培养:
悬浮状态下生长的细胞,可以通过向培养瓶中添加完全培养基来维持细胞的生长状态,一般情况下细胞密度维持在1×10^5~1×10^6个/mL(不同细胞对密度要求不同)可以维持细胞的正常生长。如需分瓶可以将细胞悬液收集到离心管中,1000rpm 离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
(三)细胞冻存
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
① 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×10^7个活细胞/mL;
② 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1mL冻存液含1×10^6~1×10^7个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息;
③ 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
① 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
② 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。