PC-3M人前列腺癌细胞
产品编号:CL-664h
细胞介绍
母系是PC-3,62岁白种人男性,四期前列腺癌;源自转移部位:骨,从PC-3诱导的小鼠肿瘤中分离得到;具有和PC-3相似的核型,PC-3/M染色体频率分布范围较窄。近73%的PC-3/M细胞有60或61条染色体。
细胞特性
来源:膀胱癌组织
形态:上皮细胞样,多角形,贴壁生长
含量:>1x10⁶cells
规格:T25x1瓶(常温运输)/ 2mL冻存管x2支(干冰运输)
用途:仅供科研使用
培养基及培养冻存条件准备
完全培养基 |
RPMI 1640培养基,89% 优质胎牛血清,10% 双抗,1% |
培养条件 |
气相:95%空气,5%二氧化碳;温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 |
冻存液 |
90%血清 + 10%DMSO,现用现配 |
细胞接收注意事项
收货当天发现异常,请在24小时内及时联系客服,逾期视为收货良好!
冻存管形式:收货后及时置于-80℃冰箱保存,若长时间不使用,应过夜转移至液氮。复苏时每管一次用完不得留存;
T25形式:①收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h(视细胞密度而定)稳定细胞状态,镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100x,200x各一张,观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况),以此做为收货依据;②有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。③运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
细胞复苏、传代、冻存操作
(一)冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
(二)细胞传代
待细胞密度达到80%~90%时,即可进行传代培养:
① 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次;
② 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化;
③ 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8mL按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
(三)细胞冻存
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
① 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/mL;
② 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1mL冻存液含1×106~1×107个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息;
③ 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
① 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
② 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。