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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
293T/ACE2
- 库存:
999
- 供应商:
武汉赛奥斯生物科技有限公司
- 肿瘤类型:
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- 细胞类型:
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- 品系:
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- 组织来源:
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- 相关疾病:
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- 免疫类型:
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- 细胞形态:
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- 是否是肿瘤细胞:
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- 器官来源:
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- 运输方式:
常温/干冰
- 年限:
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- 生长状态:
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- 规格:
1×10⁶cells
293T过表达ACE2细胞株 293T/ACE2
产品编号:CL-657h
细胞特性
含量:>1x10⁶cells
形态:上皮细胞样
生长特性:贴壁生长
规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
用途:仅供科研使用
细胞运输、保存及注意事项
复苏细胞 |
冻存细胞 |
|
包装 |
充液的T25细胞培养瓶 |
1mL冻存管 |
运输条件 |
常温 |
干冰 |
保存方式 |
75%酒精消毒瓶壁,置于37℃恒温细胞培养箱 |
-80℃冰箱中保存过夜后转入液氮/立即复苏 |
注意事项 |
① 收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁,将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们; ② 请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照,10X和20X各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据; ③ 贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在运输过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收; ④ 运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。 |
|
培养基及培养冻存条件准备:
完全培养基 |
DMEM培养基(高糖)+10%FBS |
培养条件 |
气相:空气,95%;二氧化碳,5%;温度:37℃;培养箱湿度为70%-80% |
冻存液 |
无血清细胞冻存液 |
细胞复苏、传代、冻存操作
(一)冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4~6mL完全培养基的离心管中混合均匀,1000rpm/min离心3~5min,弃去上清液。加入1mL完全培养基重悬细胞后,均匀铺于含6~8mL完全培养基的培养瓶(或皿)中,置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况。
注意:建议复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩,避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸造成人员伤害。
(二)细胞传代
① 待细胞密度达到80%~90%时,即可进行传代培养。
② 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次,吸净残余的PBS。
③ 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落,即可轻拍培养瓶至细胞全部脱落。迅速拿回操作台,加入2倍体积的、含10%FBS的培养基终止消化。
④ 将细胞悬液移入离心管中,1000rpm/min离心3-5min,弃去上清液。
⑤ 向细胞沉淀中加入1~2mL完全培养基重悬细胞,轻吹混匀。将细胞悬液按1:1比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中,添加6~8mL完全培养基,置于37℃恒温细胞培养箱中培养。后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
(三)细胞冻存
① 细胞冻存时,步骤同细胞传代的①~④,细胞计数后,加入配制好的细胞冻存液,重悬细胞,按照1×106 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
② 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80℃冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项:
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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文献和实验-expression packaging cell line. 293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高,转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。293细胞比较容易转染,是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。293细胞还有一个衍生株
实验室里大家都埋头做实验,可为什么老板每次都骂我们,你都快 30 的人了这也不会那也不会,白长这么大了,栽培了你那么多年到头来啥也指望不上。对此,我深感委屈,那个细胞我养了那么久,它还是那样衣来伸手饭来张口,我有怪过谁么?首先,这么大的细胞了,除了要自己学会传代之外,鄙人对你们还有更高的要求,你该学会自己做实验了。来,先跟我说说细胞系和细胞株的区别。细胞:原代培养物经过第一次传代成功的细胞就是细胞系,可泛指一般可能传代的细胞。而通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志
中科院高福院士课题组 2020 年发表了哪些重要的研究成果?
生长。相反,PD-1 或 PD-L1 的过表达抑制肿瘤细胞增殖和集落形成。此外,靶向 PD-1 或 PD-L1 的封闭抗体会促进细胞培养和异种移植物中肿瘤的生长。从机制上讲,PD-1 和 PD-L1 的协调激活了其主要的下游信号传导途径,包括 AKT 和 ERK1 / 2 途径,从而增强了肿瘤细胞的生长。这项研究表明,PD-1 / PD-L1 是潜在的肿瘤抑制因子,并且潜在地调节了对抗 PD-1 / PD-L1 治疗的反应,因此代表了最佳癌症免疫治疗方法的潜在生物标志物。 图源:PNAS 4、揭示沙粒
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